纳米多孔PLLA膜对晚期内皮祖细胞行为影响.pdfVIP

166 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, February 2009, Vol. 23, No.2 · · 纳米多孔PLLA 膜对晚期内皮祖细胞行为的影响 1 2 1 1 2 1 卢辉俊 冯章启 乔彤 刘晨 顾忠泽 刘长建 【摘  要】    目的 观察晚期内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs ）在纳米多孔PLLA 膜表面黏附、增殖 的情况，为优化组织工程血管支架材料提供一种新途径。 方法 新西兰大白兔，体重2.5 ～3.0 kg，雌雄不限。取兔外 周血分离和培养晚期EPCs 。采用静电纺丝技术制备纳米无序纤维、有序纤维及超级有序纤维，行低温等离子体技术改性 及Ⅰ型胶原表面涂覆，制备无序膜、有序膜及超级有序膜。实验分为A （单纯细胞）、B （无序膜）、C （普通膜）、D （有序 5 膜）、E （超级有序膜）组，将原代晚期EPCs （1 × 10 个/mL ）复合至支架材料培养，3、5、7、9、11、13、15 和17 d 后MTT 5 法检测细胞增殖能力；实验分A （无序膜）、B （普通膜）、C （有序膜）、D （超级有序膜）4 组，取浓度为1 × 10 个/mL 的第 3 代晚期EPCs 悬液3 mL 滴加至膜上，复合培养4 、12 和24 h 后沉淀法检测细胞黏附率，1、3、7 d 测定细胞增殖率，并于 复合培养后4 、24 、72 h 观察细胞形态变化。 结果 纳米PLLA 纤维直径300 ～ 400 nm ，孔隙率 90% 。培养后3、5、7、 9、11、13、15 和17 d，各组A 值均随培养时间延长而增高，细胞生长良好；A 、B 组间各时间点比较差异无统计学意义（P 0.05 ），培养后5 ～17 d，C、D 、E 组与A 、B 组间比较差异均有统计学意义（P 0.05 ）。复合培养4 h ，A 组黏附率高于B 、 C、D 组，差异有统计学意义（P 0.05 ）；12 h 及24 h ，B 、C、D 组黏附率明显高于A 组，差异有统计学意义（P 0.05 ）；各 组4 h 与12、24 h 比较差异均有统计学意义（P 0.05 ），12 h 与24 h 比较差异无统计学意义（P 0.05 ）。复合培养1、3 和 7 d，B 、C、D 组增殖率明显高于A 组，差异有统计学意义（P 0.05 ）；B 、C、D 组间除培养后1 d，其余各时间点比较差异均 有统计学意义（P 0.05 ）。形态学观察示细胞在各支架膜上生长良好，A 组及B 组细胞生长较散在、杂乱；C、D 组细胞沿 纤维定向附着、伸展、增殖并分泌ECM ，D 组细胞结构保持更好。 结论 纳米多孔PLLA 有序膜及超级有序膜支架能 促进种子细胞在材料表面黏附、增殖，并能较好保持细胞形态，是一种理想的血管组织工程支架材料；晚期EPCs 是一种理 想的血管组织工程种子细胞。 【关键词】 组织工程血管 晚期内皮祖细胞 纳米多孔PLLA 支架材料 中图分类号： R318.08 R322 文献标志码：A EFFECTS OF NANOPOROUS PLLA SCAFFOLD ON LATE ENDOTHELIAL PROGENITOR