上调hMLH1基因表达对卵巢癌药物敏感性影响.pdfVIP

网络出版时间：2014-01-28 12:22 网络出版地址：/kcms/doi/10.11844/cjcb.2014.02.0241.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2014, 36(2): DOI: 10.11844/cj cb.2014.02.024 1 探索· 发现 上调hMLH1基因表达对卵巢癌药物敏感性的影响 * 舒 丹 毛世华 谭晓燕 (重庆三峡中心医院妇产科, 重庆404000) hMLH1 摘要 构建携带错配修复基因 编码序列全长的真核表达质粒pCAN-hMLH 1, 并探讨其 对卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用。应用基因重组技术将pET28-hMLH 1中的目的基因hMLH1定 向克隆到真核表达载体pCAN, 经酶切及测序鉴定; 分别将pCAN-hMLH 1和空质粒pCAN转染进卵 巢癌耐药细胞SKOV3/DDP, 同时以对顺铂敏感的SKOV3细胞和未转染的SKOV3/DDP 细胞作为对 hMLH1 照; 应用RT-PCR和Western blot检测转染前后细胞内 mRNA和蛋白的表达变化; 四甲基偶氮 唑蓝(MTT) 比色法检测转染前后SKOV3/DDP细胞对顺铂敏感性的变化; Hoechst染色检测转染前后 细胞的凋亡。结果提示: pCAN-hMLH 1重组质粒经酶切及测序鉴定, 表明真核表达质粒构建正确; hMLH1 采用脂质体法转染SKOV3/DDP 细胞后, RT-PCR和Western blot检测到耐药细胞 内 的表达增 强; MTT结果显示转染重组质粒后SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性显著增加; Hoechst染色观察到 pCAN 转染后耐药细胞的凋亡明显增强。该研究成功构建了 -hMLH 1重组质粒, 在SKOV3/DDP 细 胞中进行表达, 并能增强耐药细胞对顺铂的敏感性, 促进耐药细胞的凋亡。 关键词 hMLH1; 错配修复; 卵巢癌; 耐药 Up-regulation of hMLH1 Gene Expression on Cisplatin Sensitivity of Drug-resistant Ovarian Cancer Cells Shu Dan*, Mao Shihua,Tan Xiaoyan (Department of Obstetrics and Gynecology, Chongqing Three Gorges Central Hospital, Chongqing 404000, China) Abstract We c