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细胞与分子免疫学杂志(Chin J Cell Mol Immunol)2013 ，29 (1) 65
· · :1007 － 8738 (20 13)0 1 － 0065 － 04
论著 文章编号
基于流式细胞术的scFv 抗体库筛选技术的建立
1 2 2 2 2＊
， ， ， ，
徐黎 明 任桂 萍 尹杰超 田 辉 李德 山
1 2
( ; ， 150070)
中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 东北农业大学生命科学学院生物制药教研室 黑龙江哈尔滨
［ ］ NlpA scFv ， 。
摘要 目的 利用 前导肽诱导抗体锚定细菌内膜建立筛选 抗体库的展示技术 为高亲和力抗体的筛选奠定基础
pNAD NlpA ， pHEN1 。 PEAI ，
方法 从 质粒中克隆出 前导肽基因序列 酶切后将该序列克隆进 表达载体中 以 质粒为模板 利用
PCR -hIL-1 ， PCR -hIL-1 scFv 。
的方法克隆得到抗 β 抗体的重链可变区和轻链可变区基因 然后利用重叠 的方法构建得到抗 β 抗体
将scFv 抗体插入到NlpA leader-pHEN1 表达载体中构建成展示scFv 的重组质粒pBSD-scFv 。将pBSD-scFv 转入到E． coli DH5α
， ， ， (FCM)
中诱导表达 原生质球制备后 采用梯度浓度的抗原进行孵育 最后经流式细胞术 检测抗体展示情况并且分选阳性群
， PCR ， E． coli DH5 ， FCM
体 利用质粒提取的方法来替代 方法拯救阳性基因 转化 α 利用 再次检测该群体展示的抗体与抗原结合
。 -hIL-1 scFv FITC ， FCM ，
情况 结果 所展示的抗 β 抗体依次
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