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# 34 # 粮 食 储 藏 2011 (2)
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谷蠹RAPD 反应体系与程序的优化
1 2 2
吴 芳 余懋群 龙 海
( 1 中储粮成都粮食储藏科学研究所 成都 610031)
(2 中国科学院成都生物研究所 成都 610041)
5
以谷蠹为研究对象, 采用 L16 ( 4 ) 交组合实验和单因素梯度实验对
MgCl2dNTP随机引物Taq 酶模板 DNA 浓度和退火温度循环次数等影响 RAPD
扩增的重要因素进行优化, 以期建立最优的RAPD 反应体系与程序实验结果表明: 各因
素最适条件为: 25LL PCR 反应体系中, 10 @ Buffer 215 LL, MgCl2 215 ol/L, dNTP
01 4 ol/ L, 随机引物960 p ol/L, Taq 酶015 U, 模板 DNA 20ng; 退火温度为37 e ,
循环次数为45 次在对谷蠹进行RAPD 分析时, 采用优化的反应条件, 规范实验操作, 使
用同厂家同批次的试剂, 实验结果就会具有很好的重复性和稳定性
谷蠹 RAPD 优化 反应体系和程序 交组合 单因素
DNA ( Rando RAPD ,
A plified Poly orphic DNA, RAPD) , ,
2+
, DNA RAPD Mg dNTPTaq
, , DNA DNA
,
[ 1]
, RAPD RAPD
RAPD ,
RAPD , ,
,
1 材料与方法
DNA ,
RAPD 11 1
[2]
[3]
RAPD
, DNA 24 h
, PCR
11 2
, , RAPD
, , : CTAB , PCR
, dNTPsTaq
[4]
RAPD ,
RAPD , RAPD 11 3
[5~ 7]
, 11 31 1 交组合优化 RAPD 反应体系
CTAB DNA,
, SBS B19 ( 5. ACCCCCGAAG3. )
, RA
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