军曹鱼△6脂肪酸去饱和酶的cDNA序列克隆与基因表达.pdfVIP

第 17卷第6期 中国水产科学 Vo1．17 No．6 2010年 l1月 JournalofFishery SciencesofChina November 20l0 军曹鱼A6脂肪酸去饱和酶的cDNA序列克隆与基因表达 许友卿，郑一民，丁兆坤 (广西大学 水产科学研究所，广西 南宁530004) 摘要：为了研究海水鱼合成高度不饱和脂肪酸 (Highlyunsaturatedfattyacids，HUFAs)的关键酶，本研究克隆了军 曹~(Racycentroncanadum)的A6脂肪酸去饱和酶的部分 cDNA序列。根据 GenBank已公布的其他鱼类的A6 脂肪酸去饱和酶 cDNA序列进行分析，设计了一对用于 PCR扩增军曹鱼的△6脂肪酸去饱和酶基因保守序列的 引物；然后以军曹鱼肝总RNA为模板，通过 RT-PCR的方法扩增出一段长度为 743bp的片段，该片段经纯化后， 连接至 pMDl8．T载体上进行测序。结果显示，该片段与欧洲狼鲈(Dicentrarchuslabrax)△6脂肪酸去饱和酶基因 的覆盖区同源性为90．4％，该蛋白结构含有2个组氨酸保守区(HDFGH和HFQHH)和2个跨膜结构域，具有典型 的A6脂肪酸去饱和酶结构特点。通过荧光定量 PCR(Rea1．timequantityPCR，RTQ．PCR)检测该基因在军曹鱼幼 鱼不同组织中的表达量，发现A6脂肪酸去饱和酶基因在军曹鱼脑的表达量最高；其次是肝；再其次是心、肠、 脾 、肾、鳃：而肌肉和皮肤的表达量相对较低，在脂肪组织 中没有检测到△6去饱和酶基因的表达。结论为，军 曹鱼具有合成 HUFAs的关键酶一△6脂肪酸去饱和酶，在其所有组织中以脑之含量最 多。r中国水产科学， 2010，l7(6)：l183—1191] 关键词：高度不饱和脂肪酸；A6脂肪酸去饱和酶：基因克隆；基因表达；荧光定量 PCR；军曹鱼 中图分类号：Q959 文献标识码：A 文章编号：1005-8737-(2010)06-1183-09 军曹鱼(Rachycentroncanadum)是暖水性与肉 作用。已知淡水鱼类可以通过 11—6和／或n一3途径 食性海洋鱼类，广泛分布于热带和亚热带。军曹 去饱和及碳链延长作用，分别把植物产品中的 鱼肉质好，是可供蒸煮、熏制或生鱼片食用的全 18：3n．3和 18：2n一6脂肪酸转化为长链 HUFAs。 球新海洋食品，具有巨大的国际市场潜力，而且 在这 2个途径 中，△6去饱和酶、A5去饱和酶和 该鱼抗病力强、存活率高，生长速度快，因而被认 碳链延长酶是合成的关键酶[5-6]。延长酶普遍存在 为是当前人工网箱养殖的理想鱼种 】。在开展军 于多数淡水鱼和海水鱼中[7-91，但是，至今只从少 曹鱼商业化人工养殖过程 中，营养饲料是关键 的 数几种鱼类克隆了脂肪酸去饱和酶 cDNA J， 制约因素之一，因此有必要研究军曹鱼的基础营 例如从淡水斑马鱼(Dano／,erio)克隆了△5和△6双 养、生理和生化学L3J。 功能去饱和酶 】【引，从大西洋鲑(Salmo 口， 克隆 鱼类必需营养素 中的高度不饱和脂肪酸 了单个△5去饱和酶和A6去饱和酶¨训。海水鱼是人 (HUFAs)，特别是二十二碳六烯酸(docosahexaenoic 类获取EPA和DHA等HUFAs的最重要来源 J【埔J， acids，DHA)和 二 十碳 五烯 酸 (eicosapentaenoic 野生海水鱼可以从摄人的藻类 、甲壳类等食物获 acid，EPA)，在维持机体的正常机能、促进生长、 取EPA和DHA等HUFAs，但是，能否 自行合成高 发育、繁殖和提高成活率等方面发挥重要的生理 度不饱和脂肪酸，还是一个探究中的问题 l【7-20]o 收稿 日期：2009-11-02；修订 日期：2009-11--30． 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目(3057144