农杆菌介导的AtPCS1基因转化陇东苜蓿的初步研究.pdfVIP

第 46卷 2010年第 6期 西 北 师 范 大 学 学 报 (自然科学版) Vo1．46 20lO No．6 JournalofNorthwestNormalUniversity (NaturalScience) 79 农杆菌介导的AtPCS1基因转化 陇东苜蓿的初步研究 王鸣刚，骆焕涛，李盼盼 (兰州理工大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730050) 摘 要 ：利用植物表达载体 pBI121一AtPCS1转化农杆菌 LBA4404，经菌落 PCR鉴定获得 阳性菌 ，利用叶盘法 以重组 的农杆菌侵染陇东苜蓿 的子 叶．采用 GUS组织化学染色和对部分转基 因再 生植株进行 PCR鉴定 ，初步结果表 明 AtPCS1基 因 已成功整合到苜蓿基 因组． 关键词 ：陇东苜蓿；AtPCS1基 因；遗传转化 ；组织培养 ；转基 因植株 中图分类号 ：Q 78 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—988X(2010)06—0079—04 Theresearchonagrobacterium—mediatedtransformationof AtPCS1intoM edicagosativa L W ANG M ing—gang， LUO Huan—tao，LIPan—pan (SchoolofLifeScienceandEngineering，LanzhouUniversityofTechnology，Lanzhou730050，Gansu，China) Abstract：Agrobacterium LBA4404aretransferredwithexpressplasmidpBI121-AtPCS1andidentifiedthe positivestrainsbybacterialcolony PCR，and AtPCS1gene istransferred into cotyledon ofLongdong alfalfabyleafinfectionmethod． TheprimaryresultsofhistologicaldetectionofGUSactivityandAtPCS1一 specificPCR tosomeregenerationtransgenicplantsshow thattheAtPCS1hasbeentransferredintoalfalfa genome· Keywords：Longdongalfalfa；AtPCS1gene；genetictransformation；tissueculture；transgenicplant 由于工业生产的迅速发展 ，环境 中重金属的毒 苜蓿由于适应性广 、生长迅速及生物量大，是 性成为影 响环境和人类健康 的一个主要 问题 [】]． 可用于污染土壤生物修复的较好材料．本研究用克 在重金属离子的诱导下，植物细胞内的植物螯合肽 隆 的拟 南 芥基 因 AtPCS1构建 植 物 表达 载体 合成酶 (phytochelatinsynthase，PCs)能够 以谷胱 pBI121一AtPCS1，通过农杆菌 LBA4404介 导转化 苷肽 (glutathione，GSH)为底物迅速合成植物螯合 苜蓿 ，期望获得转 AtPCS1基因植株 ，为今后培育 肽 (phytochelatin，PC)_L2]，PC可与金属离子螯合 能够 “超富集”重金属的苜蓿提供基础材料． 形成复合物，通过液泡上的 ABC型转运蛋 白运输 1 材料与方法 到液泡从而将重金属离子 隔离_l3]．近几年 ，PCs 基因已分别从多种植物 中克 隆_4]，研究表 明，过 1．1 材料 量表达 GsH合成途径 中的关键酶，可明显提高植 农 杆 菌 LBA4404 由本 实 验 室提 供 ，质 粒 物对重金属 的耐受和积 累_5]．含有过量表达 PC pBI121