Nephrin稳定血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞细胞骨架改变的机制研究.pdfVIP

· 2216· 中国病王l目牛理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(12)：22鱼—-2—221 [文章编号】 1000-4718(2012)l2—2216—06 Nephrin稳定血管紧张素 Ⅱ诱导的足细胞 细胞骨架改变的机制研究术 梁 伟， 任志龙， 韦忠平， 刘以鹏， 陈 铖， 丁国华 (武汉大学人民医院肾内科 ，湖北 武汉430060) [摘 要] 目的：研究足细胞裂孔膜分子nephfin调节血管紧张素Ⅱ(AngH)诱导的足细胞骨架分布改变的 分子机制。方法 ：用AngⅡ及AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦或Akt抑制剂 LY294002刺激足细胞，FITC—phalloidin染色 标记F—actin，分析足细胞骨架运动。Real—timeRT—PCR、RT—PCR和Westernblotting检测nephfinmRNA和蛋 白表达。转染 nephrin全长表达质粒 (pcDNA3．1一mNPHS1)，建立稳定转染足细胞系 ，Westernblotting检测转染细 胞的Akt磷酸化水平，FITC—phalloidin染色分析高表达nephfin对F—actin分布影响。结果：AngⅡ和LY294002刺 激后，足细胞的F—actin重组 ，应力纤维减少，形成F—actin外周环。氯沙坦显著抑制F—actin重排。AngH刺激后 nephfinmRNA和蛋白表达显著降低，Akt磷酸化水平降低。pcDNA3．1一mNPHS1转染显著上调足细胞Akt磷酸化 水平，促进足细胞短线状足突形成，部分抑制 AngⅡ诱导的骨架重排。结论 ：PI3K／Akt是 nephfin和AngH的共同 下游通路。Nephfin能通过PDK／Akt途径部分稳定AngII诱导的足细胞细胞骨架改变。 [关键词] 血管紧张素 Ⅱ；足细胞 ；Neph6n；细胞骨架 [中图分类号] R34 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．12．019 Roleofnephrin inpreventingangiotensinH -—inducedcytoskeletalrear-- rangementinglomerularpodocytes LIANG Wei，REN Zhi—long，WEIZhong—ping，UU Yi—peng，CHEN Cheng，DING Guo．．hua (DivisionofNephrology，PeoplesHospitalofWuhanUnive~ity，Wuhan430060，China．E—mail：ghxding@gmail．com) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheroleofnephfin，aslitdiaphragm—associatedprotein，inangiotensinH (AngⅡ)一inducedcytoskeletonrearrangementinpodocytes．METHODS：Immortalizedmousepodocyteswereexposedto AnglI(10 mol／L)withorwithoutAngⅡreceptorantagonistlorsatanandAktinhibitorLY294002．FITC—conjugated phalloidinwasusedtostainF—actin，andsemi—qunatitativesystemwithcorticalF—actinscore(CFS)wasintroducedto naalyzethedegreeofactincytoskeletonarrangement．Theexpressionofnephrinwasassessedbyquantitativereal—timeRT — PCR．RT—PCR nadWestern blotting．Undifferentiatedpodocytesweretransfecte