靶向COL1A1基因的shRNA对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响.pdfVIP

· 2182· 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012，28(~12)：2182-21 [文章编号] 1000—4718(2012)l2—2182—05 靶 向COL1A1基因的 shRNA对人乳腺癌 MDA—MB一231细胞增殖与凋亡的影响 余海浪 ， 刘安玲 ， 周珏宇 ， 孟 伟 ， 郑文岭 ， 马文丽 (南方医科大学基因工程研究所 ，广东 广州510515；华南基因组研究中心，广东 广州 510800) 【摘 要] 目的：探讨抑制 I型胶原 1链 (COLIA1)基因表达对人乳腺癌MDA—MB一231细胞增殖及凋亡 的影响。方法：用已构建的pSileneer2．1一U6一COLIA1重组质粒转染乳腺癌细胞MDA—MB一231，采用RT—PCR 和Westernblotting技术检测重组质粒对 COLIA1基因表达的影响，M1Tr比色法测定细胞增殖的抑制情况 ，流式细胞 术检测细胞周期和细胞凋亡的变化，Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡 的形态学变化。结果：RT—PCR及 Westernblotting结果证实重组质粒在mRNA和蛋白水平分别显著抑制 COLIA1基因表达；pshRNA—COL1A1转染 组细胞的增殖速度明显减慢且呈时间依赖关系；与对照组相比，pshRNA—COL1A1组细胞明显阻滞于G。／G。期，细 胞凋亡率显著升高(P0．05)，出现细胞质浓缩、核凝聚等凋亡形态学变化。结论：pshRNA—COL1A1能有效抑制 乳腺癌 MDA—MB一231细胞增殖，并诱导其凋亡 ，为以COLIA1为靶点的乳腺癌基因治疗提供实验依据。 【关键词] RNA干扰；I型胶原 1链；乳腺肿瘤 ；细胞凋亡 [中图分类号] R737．9 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．12．013 EffectsofshRNA targetingCOL1A1geneonproliferationandapoptosis ， ofhumanbreastcancercelllineMDA—MB 一231 YUHai—lang，LIUAn—ling，ZHOU Jue—yu ，MENG Wei，ZHENG Wen—ling ， MA Wen—li (InstituteofGenetciEngineering，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China； hCina GenomicsRe— searchCenter，Guangzhou510800，China．E—mail：wenli668@gmail．corn) [ABSTRACT] AIM．ToinvestigatetheeffectsofshRNA—mediatedcollagentypeIalpha1(COLIA1)genesi· lencingontheproliferationandapoptosisofhumanbreastcna cercelllineMDA —MB一231．METHODS：Thespecificre— eombinantvectorpSilencer2．1一U6一COL1A1wastransientlytransfeetedintohumna breastcancercelllineMDA —MB一 231withlipofeetamine．RT—PCR andWesternblottingwereperformedtodetecttheexpressionlevelsofCOLIA1．MTY assayWas employedtoevaluatetheeffectofCOL1A1genesilencingonthecellproliferation．Flow cytometrywasusedto detemr inetheapoptosisnad