甘蓝型油菜BnPPR636及其启动子的克隆与表达分析.pdfVIP

分子植物育种，2012年，第 1O卷，第6期，第693-700页 MolecularPlantBreeding，2012，Vo1．10，No．6，693—700 研究报告 ResearchReport 甘蓝型油菜BnPPR636及其启动子的克隆与表达分析 彭鹏飞 1胡琼 1李云昌 ·刘道敏 ：付丽 1张洪 1梅德圣 1’ 1中国农业科学院油料作物研究所国家油料作物改 良中心，农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，武汉，430062；2安徽省六安市农业 科学研究所，六安，237400 ·通讯作者， 摘 要 PPR蛋 白对植物的生长发育、逆境抗性以及育性具有重要的调节作用。本研究根据氨基酸序列的 保守性，利用CODEHOP方法，通过简并引物扩增甘蓝型油菜基因组DNA，得到PPR基因片段。结合 RACE技术，在甘蓝型油菜品系 120中扩增得到了PPR基因eDNA的全长序列。分析发现该PPR基因编码 一 个含636个氨基酸的蛋白质，具有 11个PPR基序，不含有内含子，具有典型的PPR基因特征，命名为 BnPPR636。Blast比对发现，BIlPPR636与 白菜P2克隆的一个未知蛋 白的氨基酸序列一致性最高，达到 75％。RT．PCR分析表明，BnPPR636在花中的表达量最高，在根与角果中的表达量次之，叶和茎中较低。进 化树分析表明，BnPPR636蛋白与其他植物中和CMS育性恢复有关的PPR蛋白序列的一致性较高。以基因 组DNA为模板，利用染色体步移技术，得到了BnPPR636基因起始密码子上游 1145bp的DNA片段。经 生物信息学软件分析表明，该序列具有典型的启动子序列特征，并含有许多相关的顺式作用元件，可能参与 调节花和根的发育。 关键词 油菜，同源克隆，PPR基因，CODEHOP，AR CE，染色体步移 Clloonnlinngg and Expression Anaal1)ys~s ofBnPPR663366 and Its Promoter in Rapeseed(Brassicanapus) PengPengfei HuQiong LiYunchang LiuDaoming FuLi ZhangHong MeiDesheng 1OilCropsResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSciences，NationalCenterf0rOilCropsImprovement，KeyLaboratoryofBiology andGeneticImprovementofOilCrops，MinistryofAgriculture，Wuhan，430062；2AgriculturalScinecesInstiutteofLuanMunicipal，Liu’all，237400 DOI：10．3969／mpb．010．000693 Abstract PPRproteinplaysanimportantroleinplnatdevelopment，especiallyforcharactersinvolvedinfertility restorationandresistancetobioticandabioticstresses．Basedontheconservedaminoacidsequence，arfagmentof genewasclonedinBrassica byCODEHOPmethod．The从 llengtheDNA ofthegenewasamplified byAR CEwhichcontainsna OI Of1908bpinlengthencodingaproteinwith636aminoacidsincludingllPPR motifs．nma edB 636．GenomicDNA sequenceofB 636wascompletelyidenticaltothecDNA sequence． indicatingnoinrtoninhtegene．Thehi曲esthomologywasofundwithallunknownproteinofP2cloneofB．rapa, whichhad75％ identiyt toBnPPR636．RT．PCRwim B 636genespecificprimersshoweditwashi lv expressedinflower，moderatelyexpressedinrootnaddevelopingsilique，wiht lowestexpressioninl