转玉米C4型pepc水稻成熟胚为外植体的水稻悬浮细胞系的优化.pdfVIP

分子植物育种，2012年，第 lO卷，第6期，第644-654页 MolecularPlantBreeding，2012，Vo1．10，No．6，644—654 研究论文 ResearchArticle 转玉米C4 pepc水稻成熟胚为外植体的水稻悬浮细胞系的优化 王满 李霞 石牡丹 钱宝云 魏晓东 方先文 江苏省农业科学院粮食作物研究所，江苏省优质水稻工程技术研究中心，南京，210014 通讯作者．jspplx@jaas．ac．cn 摘 要 为了研究外源玉米光合作用关键酶C 型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvatecarboxy- lase，PEPC)基因在C，植物水稻中提高光合效率的分子机理，本研究以高表达玉米C 型pepc水稻(PC)和未 转基因野生型Kitaake(WT)为材料，探索高效且稳定水稻悬浮细胞系建立的方法。结果表明：PC成熟胚愈伤 组织的诱导培养基中添加2mg／L2,4一D和 1mg／L6-BA，可出诱导出高频的愈伤组织；再通过 3次继代培养 (24 ．5mg／L2，4一D，2-0．2mg／L6-BA，1mg／LABA)，逐步降低 2，4一D和 6-BA的浓度 ，可获得 了疏松、颗粒状 且分散的愈伤组织块；然后转接到水稻悬浮细胞液体培养基中(0．5mg／L2,4一D，0．2mg／L6-BA和 1mg／L ABA)，在28℃下培养，新原液的比例为3：1，经42d，可建立稳定且高效的供试水稻悬浮细胞系。 关键词 水稻，转 C pepc基因水稻，成熟胚，悬浮培养，激素调优 Optiming CellSuspension Culture ofMautreEmbryo ofTransgenicC4 PhosphoenolpyruvateCarboxylase(pepc)Rice WangMan LiXia’ ShiMudan Qina Baoyun WeiXiaodong FnagXianwen JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，JiangsuHighQualityRiceResearchCenter，Nanjing，210014 Correspondingauthor，jsppix aas．ac．ca DOI：10．3969／mpb．010．000644 Abstract Inordertostudythemolecularmechna ism to improvephotosynhteticefficiencyofhteexogenous photosynthesiskeyenzyme，maize—C4phosphoenolpyruvatecarboxylase(PEPC)geneinhteC3plantrice．nIthis research，trnasgenicricewithhighexpressedmaizeC4pepcgene(PC)anduntransformedwild-typeKitaake(WT) usedasmaterialstoexploretheestablishmentofefficientnadstablericesuspensioncelllines．Theresultsshowed thatthePC matureembryocallusinductionmedium byadding2mg／L2,4一Dand lmgL／6-BA Callinducecalli wihthighfrequency；subculturethreetimes(2-0．5mgL／2,4一D，244)．2mg／L6一BAandlmg／LABA)andgra, duallyreducehteconcentrationof2,4一D and6-BA，cangenerateloose，grnaularlikenaddispersedcallusblock； thenrtansferredintoinliquidmedimu officesuspensioncells(O．5mg／L2，4一D，0．2mgL／6-BAnad1mg／LABA) underthecultureof42daysat28~C withdilutionratioof3：1，astableandhig【hefficientricesuspensioncelllines canbeestablished． Keywords Rice(OryzasativaL．)，TransgenicricewihtC4pepcgene，Matureembryocallus，Cellsuspension， Optimizati