LC-MS法测定拟南芥原生质体脱落酸的研究.pdfVIP

华南师范大学学报 (自然科学版) 2012年 11月 JOURNALOFSOUTHCHINANORMALUNIVERSITY 第 44卷第4期 NOV．2012 (NATURALSCIENCEEDITION) Vo1．44 No．4 文章编号：1000—5463(2012)04—0109—04 LC—MS法测定拟南芥原生质体脱落酸的研究 郭 磊，MohammedHumayunKABIR，童建华，黄志刚，萧浪涛 (湖南农业大学植物激素与生长发育湖南省重点实验室，长沙 410128) 摘要：利用高效液相色谱与质谱联用法(LC—MS法)对从土培拟南芥叶片和水培拟南芥根系中分离的原生质体进行 脱落酸含量分析．结果表明，所测原生质体的脱落酸含量与原生质体数 目之间具有较好的线性关系，相关系数分别 为0．9923和0．9931．脱落酸含量的检测下限为1．07rig／mL，土培拟南芥叶片和水培拟南芥根系原生质体检测下限 分别为3万个和2万个．该研究以原生质体为材料，避免了细胞间隙中的复杂化学成干扰，提高了植物激素测定的灵 敏度和精度，完善了经典的植物激素测定技术． 关键词：脱落酸；高效液相色谱与质谱联用；拟南芥；原生质体 中图分类号：Q946 文献标志码 ：A doi：10．6054／j．jscnun．2012．09．022 脱落酸(ABA)参与了植物的种子萌发、气孔运 少影响植物激素检测灵敏度 的物质，用这种材料作 动、开花、结果和衰老等多个生长发育进程并在逆境 为植物激素检测的对象，可以降低误差、提高植物激 应答系统中起着重要的作用 ¨J．很多ABA缺陷或 素测定的精确度和灵敏度．本文以原生质体为材 抗性突变体种子不休眠或发生胎萌，多个 ABA超敏 料，研究了采用LC—MS法测定拟南芥原生质体的 感的拟南芥突变体种子休眠程度加强，表明ABA是 脱落酸，避免了细胞间隙中的复杂化学组成干扰，提 一 种重要的内源萌发抑制剂，许多种子成熟期问有 高了植物激素测定的灵敏度和精度，完善了经典的 2个ABA积累高峰期…．脱落酸在植物的逆境信号 植物激素测定技术． 转导系统中起着重要的作用 ．水稻在水分胁迫状 态下，根源 ABA是植物体 内ABA的主要来源，可能 1 材料与方法 是植物体在逆境情况下根系感受逆境信息而产生的 一 种向地上部传递的逆境信号 ．因此，准确测定 1．1 试验材料及培养 脱落酸的含量对于深入阐明脱落酸介导的发育过程 试验材料 ：拟南芥 (ArabidopsisthalianaL．)哥伦 和逆境应答等有关机制十分必要和迫切． 比亚生态型 (Col一0)．土培拟南芥的培养条件 ：拟南 传统植物激素检测方法主要有放射免疫法、酶 芥 Col一0种子消毒、春化后，播种于混合土(m(营 联免疫法、气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱 养土)：m(蛭石)：m(沙子)=1：1：1)中，生长 30d左 一 质谱联用法和液相色谱 一质谱联用法等 。。J．这 右(光照周期为 16h光照／8h黑暗，温度为 22℃， 些检测方法通常是 以植物组织为测定对象，但存在 湿度为70％)，取莲座叶用于叶片原生质体的制备 一 定局限性．首先植物组织中的大量木质素、纤维 (图1A)．液体MS培养拟南芥条件 ：拟南芥 Col一0 素、蜡质、角质等成分，均是构成材料鲜重或干重的 种子消毒、春化后，播种于MS固体培养基上 (光照 一 部分，但在不同植物组织和器官中的含量不一致， 周期为 16h光照／8h黑暗，温度为 22℃，湿度为 以原生质体数量代替植物组织质量对植物激素进行 70％)，生长 7d后转入 MS液体培养基在