猪伪狂犬病病毒的分离与鉴定.pdfVIP

上海农业学报 2012，28(4)：15—17 ActaAgriculturaeShanghai 文章编号：1000—3924(2012)04—015．03 猪伪狂犬病病毒的分离与鉴定 彭丽英，倪建平，冯晓东，徐伟林 (上海佳牧生物制品有限公司，上海 201106) 摘 要：用猪睾丸细胞 (ST细胞)从 1只发病仔猪 的脑组织 中分离 到 1株病毒 ，第 6代时的毒价 为 10 TCIDso／mL。用猪伪狂犬病病毒特异性引物可从该病毒细胞培养物中扩增出与预期大小相同的柏 基因部 分核苷酸片段。测序结果表明：该 gB基 因的部分序列与 GeneBank登录的 5株 PRV 同源性为 98．0％～ 99．5％。接种家兔后可观察到典型的伪狂犬病临床症状，ELD 。为 10。 。／mL，分离毒可被PRV阳性血清中和。 该分离毒为猪伪狂犬病病毒强毒株。 关键词 ：猪 ；伪狂犬病毒 ；分离；鉴定 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A Isolation andidentificationofporcinepseudorabiesvirus PENG Li—ying，NIJian—ping，FENG Xiao—dong，XU W ei—lin (ShanghaiJiamuBiologicalsLimitedCompany，Shanghai201106，China) Abstract：A virulentstrainofpseudorabiesvirus(PRV)from thebrain tissueofadiseasedpigletwas isolatedwithswinetestiscells(STcells)，anditsviurstiteratthe6thpassagewas10 TCID50／mL．Byusing specificprimersofporcinepseudorabiesvirus，apartialnucleotidefragmentofgB genethesamesize asexpected wasamplified from the viruscellculture．The sequencing showed thatthe homology betweenthepartialsequenceofgB geneand thoseof5strainsofPRV registeredintheGenBankwas 98 0％ 一99 5％．The typicalclinicalsymptomsofpseudorabiescouldbeobserved in the inoculated rabbitsandtheELD50was10一∞·／mL．Theisolatedviruscouldbeneutralizedbythepositiveserumof PRV ． Keywords：Pig；Pseudorabiesvirus；Isolation；Identification 伪狂犬病 (Pseudorabies，PR)是 由伪狂犬病病毒 (Pseudorabiesvirus，PRV)引起 的多种家畜和野生 动物以发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染病 ，又称奥耶斯基病 (Aujeszky’sdisease)叭。伪狂犬病毒(PRV)属疱疹病毒亚科，水痘病毒属。猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒 (PRV)引起猪的一种急性传染病，主要引起种猪不育、妊娠母猪流产、产死胎及木乃伊胎，新生或断奶仔猪高 发病率及高死亡率、育肥猪增重减慢等，该病现已呈世界分布，成为危害全球养猪业的主要传染病之一。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 细胞 ST、BHK．21、Marc．145细胞由上海佳牧生物制品有限公司保存 。 1．1．2 试验动物 成年健康家兔，体重 1．5～2．0kg，购 自上海市实验动物中心。PRV阴性仔猪来源于 上海南汇某猪场 。 1．1．3 引物 根据文献]-2-]设计 PRVgB基 因引物 ，上游引物 ：5’TGTACcTGACCTACGAGGCGTCA 收稿 日期：2012—02—07初稿 ；2012—11—01二改稿 基金项 目：上海农科院院发项 目[农科发