新型吡啶卟啉-蒽醌二元化合物的合成及其与DNA相互作用研究.docVIP

新型吡啶卟啉-蒽醌二元化合物的合成及其与DNA相互作用研究 黄晓媚 黄锦汪* 中山大学化学与化学工程学院无机化学与材料研究所 广州 510275 摘要 卟啉化合物具有独特的结构和优越的物理、化学及光学特征，在生命科学、生物化学、药物化学等领域具有重要的理论意义和潜在的应用价值。作者在查阅了大量文献的基础上，设计合成了一种新型的吡啶卟啉—蒽醌二元化合物。建立了方法简便、易于实现合成的卟啉—蒽醌二元化合物的新合成方法，并通过粘度、紫外-可见吸收光谱和稳态荧光滴定对它与DNA的相互作用进行了研究。研究表明了吡啶卟啉-蒽醌二元化合物是以插入作用与DNA相互作用的。蒽醌组分就是对DNA插入的组分。这直接表现在吡啶卟啉-蒽醌二元化合物的光谱性质上，随着体系中DNA浓度的增大，紫外-可见吸收光谱逐渐减弱，荧光光谱逐渐增强，粘度也逐渐增大。 关键词： 卟啉—蒽醌二元化合物，DNA 前言 卟啉（图一）是重要的生物配体，是一类特殊的大环共轭芳香体系，由四个吡咯构成的近似平面，具有弹性的共轭环兼有供电子和受电子的双重性能。 [图一] 天然存在的卟啉通常在吡咯环上含有取代基，人工合成的卟啉则大多在四个中位（5，10，15，20位）引入取代基。天然卟啉化合物具有特殊的生理活性。1967年Adler A. D.[1]提出用吡咯和芳醛在酸性介质中进行缩合反应，直接合成卟啉类试剂的简便方法，从此，卟啉类试剂的人工合成和应用在国内外迅速发展起来。人工合成卟啉来模拟天然卟啉化合物的各种性能一直是人们感兴趣和研究的重要课题[2-6]。 卟啉化合物对DNA或RNA具有一定的亲和力，它们具有易于在组织细胞尤其是肿瘤细胞中聚集的特性，从而使肿瘤细胞易于接受光辐射。蒽醌类化合物分子是一个刚性的大平面结构，具有良好的DNA光断裂特性，能插入到DNA螺旋分子结构中相邻两单元[13]，阻碍DNA 在DNA及 RNA复制中的模板作用，对DNA产生有效的光切割，而且，蒽醌类化合物是一个普遍存在的电子受体， *基金项目 中山大学化学与化工学院第届创新化学实验基金项目（批准号：0）资助 第一作者 （198年出生），女，中山大学化学与化工学院化学专业级 指导教师 Email：ce@zsu.edu.cn 与DNA的结合常数可达105M-1。利用卟啉与肿瘤细胞的亲和性和蒽醌对DNA的插入作用，卟啉-蒽醌二元化合物这一类新型的DNA光断裂试剂，有望成为抗癌、抗肿瘤的化学治疗试剂。 而在研究其与DNA相互作用的时候，我们采用荧光光谱、紫外可见光谱以及粘度法来对其进行跟踪。其中，在缺乏晶体结构数据的情况下，用粘度来判断化合物与DNA是否以插入方式结合，其结果可能比光谱数据更具有说服力。一般来说，当化合物插入DNA时，DNA相邻的碱基对之间的距离增大，导致DNA双螺旋伸长，从而DNA的粘度增大[14]。紫外-可见吸收光谱是研究化合物与DNA相互作用的最常见的方法之一，它具有操作方便、结果直观的特点。当化合物以插入模式与DNA结合时，其吸收光谱会出现一定的减色效应和吸收峰红移现象。荧光光谱也可以用来研究化合物与DNA的作用机制。若化合物与DNA结合后，荧光光谱发生变化，说明化合物与DNA之间发生了某种方式的结合。 我们曾合成了苯基卟啉衍生物—蒽醌二元化合物并初步研究了其与DNA相互作用的性质，发现了卟啉—蒽醌二元化合物是以插入方式与DNA相互作用的，插入组分为蒽醌。蒽醌组分对DNA的插入作用可以反映在卟啉组分的光学性质上。在研究中，我们发现卟啉—蒽醌二元化合物在含20%DMSO的缓冲溶液中的溶解度较差，这可能影响到研究结果的可靠性。因此，为了扩大合成的卟啉—蒽醌二元化合物在缓冲溶液的溶解度，我们采用了增大卟啉的水溶性的办法，就是引入了吡啶基。吡啶卟啉通常具有较大的水溶性。为此，本论文合成了一种新型的吡啶卟啉—蒽醌二元化合物，并研究了它与DNA的相互作用。 实验部分 （一）、试剂和仪器 1．实验试剂 吡咯，AR，FLUKA公司，反应前蒸馏，收集128-138℃馏分。苯甲醛，AR, 上海试剂一厂，反应前蒸馏。3-吡啶甲醛，AR，ACROS公司。对羟基苯甲醛，AR，广州化学试剂厂。硅胶G（60型），青岛海洋化工集团公司。硅胶H（柱层析用，200-300目），上海五四化学试剂有限公司，使用前105℃活化1小时。1-（氨基）蒽醌，AR，东京化成工业株式会社。2-氯乙酸，AR，ACROS公司。 二氯亚砜，AR，广州化学试剂厂。无水乙醇，甲醇，三氯甲烷，丙酸，AR，广州化学试剂厂。 无水碳酸钾，AR，北京化工厂，使用前110℃烘烤4小时。N，N-二甲基甲酰胺，AR，广州化学试剂厂。小牛胸腺DNA(CT-DNA), BR,