血小板裂解液对人脐带间充质干细胞体外成软骨分化的影响.pdfVIP

1250 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, October 2011, Vol. 25, No.10 · · 血小板裂解液对人脐带间充质干细胞体外 成软骨分化的影响 1 1 1 2 1 3 1 1 冯学涛 田少奇 孙康 张积华 张才龙 刘世海 周明 吕江涛 【摘  要】    目的 探讨血小板裂解液（platelet lysate ，PL ）在体外定向诱导人脐带间充质干细胞（human umbilical cord derived mesenchymal stem cells，hUCMSCs ）分化成软骨细胞中的作用。  方法 取健康产妇自愿捐赠脐带，采用 胶原酶消化法分离hUCMSCs ，体外培养扩增，流式细胞仪进行细胞表型鉴定。根据加入诱导培养基成分不同将实验分 为以下3 组：A 组为H-DMEM 培养基、10%FBS 及 10%PL，B 组为H-DMEM 培养基、10%FBS、10 ng/mL TGF-β 、1 × 1 -7 10 mol/L 地塞米松、50 μg/mL 维生素C 及 1% 胰岛素铁硒传递蛋白（insulin-transferrin-selenium ，ITS ），C 组为 H-DMEM -7 培养基、10%FBS、10 ng/mL TGF-β 、1 × 10 mol/L 地塞米松、50 μg/mL 维生素C、1%ITS 及 10%PL。诱导培养2 周， 1 甲苯胺蓝染色检测各组软骨细胞基质的分泌，免疫荧光检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达，半定量RT-PCR 检测蛋白聚糖 （Aggrecan ）和Ⅱ型胶原表达。  结果 分离得到的hUCMSCs 不表达造血细胞的表面标记CD45、CD34 和HLA-DR ，而 表达黏附分子和MSCs 表面标记CD44、CD105 和CD146 。甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色示C 组呈阳性，B 组 呈弱阳性，而A 组均呈阴性。半定量RT-PCR 检测示Aggrecan 和Ⅱ型胶原在B 、C 组中均有表达，A 组中未见表达；C 组 Aggrecan mRNA 和Ⅱ型胶原mRNA 表达明显高于B 组，差异均有统计学意义（P 0.05 ）。  结论 单纯10%PL 不能诱 导hUCMSCs 成软骨分化，但它可当作成软骨诱导培养基的辅助添加剂，对hUCMSCs 成软骨分化有明显促进作用，为构 建组织工程软骨提供了新的可利用条件。 【关键词】 组织工程软骨 血小板裂解液 人脐带间充质干细胞 软骨细胞 EFFECT OF PLATELET LYSATE ON CHONDROGENIC DIFFERENTIATION OF HUMAN UMBILICAL CORD 1 1 1 2 DERIVED MESENCHYMAL STEM CELLS IN VITRO/FENG Xuetao , TIAN Shaoqi , SUN Kang , ZHANG Jihua , ZHANG 1