藏绵羊脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因的克隆及序列分析.pdfVIP

第36卷第2期 西南民族大学学报 ·自然科学版 JournalofSouthwestUniversityforNationalitiesN·aturalSeienceEdition 文章编号：1003．2843(2010)02．0214．06 藏绵羊脂肪酸结合蛋白(H．FABP)基因的克隆及序列 分析 韦吉春，徐亚欧，毛亮，袁伟，何孝凡 (西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041) 摘 要：利用RT-PCR、T-A克隆技术获得了藏绵羊H，FABP基因，并对克隆序列进行分析．结果显示，藏绵羊H-FABP编码 基因全长402bp，编码 133个氨基酸．将藏绵羊H-FABP基因及氨基酸序列分别与GeneBank中公布的山羊、水牛、家牛、野 牦牛、猪、马、狗7种动物进行序列一致率比 结果显示，藏绵羊与所选的7种动物的H-FABP基因序列一致率在90．8％～ 99．5％-~-间，H-FABP氨基酸序列一致率在93．2％一1o0％之间．其中，藏绵羊与藏山羊H-FABP基因存在2个位点核苷酸差异： 114位碱基位点A．一G和第 129位碱基位点T—C，但两个位点的核苷酸差异均为同叉密码子，藏绵羊与山羊H-FABP氨基酸 无差异． 关键词：藏绵羊；脂肪酸结合蛋白基因；克隆；序列分析 中图分类号：$826 文献标识码：A 哺乳动物中的心脏脂肪酸结合蛋I~(heartfattyacidbindingprotein，H．FABP)基因和脂肪细胞型脂肪酸结合 蛋I~(adipocytefattyacidbindingprotein，A．FABP)基因被视为肌内月~ (Intramuscularfat，IMF)的两个候选基因． 心脏脂肪酸结合蛋白基因在对脂肪酸需求较高的乳腺、骨骼肌和心肌等组织中表达，其主要作用是与脂肪酸结 合后，将脂肪酸从细胞膜上运到脂肪酸被氧化和磷脂及甘油三酯的合成位置．1997年 Gerbens等成功将猪的 H．FABP基因和 A．FABP基因分别定位于 6号染色体和 4号染色体上，其后又利用候选基因法研究发现猪 H．FABP的多态性与体重、背膘厚以及IMF的含量显著相关111．在杜洛克猪中发现了Hinfl、HaelII和MspI三个 多态性酶切位点．2004年李武峰等利用了PCR．RFLP方法研究牛H．FABP基因，在牛H．FABP中发现了 1个 intron2上的HaelII．RFLP变异酶切位点，在进一步的研究中发现该酶切位点是由第 1006位的碱基C．G的突变引 起[21．2003年叶满红等利用PCR技术扩增出鸡A．FABP基因intron3和H—FABP基因intron2片段[31．2003年郭松 长以8个猪群为研究对象，利用PCR．RFLP方法分析了H．FABP基因的HaelII限制性酶切位点的遗传多态性，研 究发现H．FABP基因多态对猪胴体、肉质f生状、生长有一定影响，研究结果可以作为猪生产中相关性状尤其是猪 肉质性状改善的理论依据4【】．以上研究说明H．FABP基因的酶切多态性对动物肉质性状、生长、胴体等具有一定 影响5【1．H．FABP在多种哺乳动物中已有研究[6-91，但是在藏绵羊中还未见报道，藏绵羊H—FABP基因的研究结果 可以作为其在畜牧生产中特别是藏绵羊肉质性状的改善提供理论依据． 1 材料与方法 1．1 材料 用高压灭菌的剪刀取刚屠宰的藏绵羊瘤胃组织，迅速放入液氮罐中带回实验室．质粒pMD18-TVector购 自 大连宝生物公司；稳压稳流电泳仪(DYY_3—6B北京六一仪器厂)，GELDOC2000凝胶成像系统(美国BIO—RAD 公司)，梯度PCR仪(德国Biometra公司)，高速大容量离心机(日本日立公司)．Trizol、RNAPCRKit(AMV)Ver．3．0、 收稿 日期：201O-O1．14 联系作者：徐亚欧(1957．)，男，四川茂县人，西南民族大学生命科学与技术学院教授，E-mail：xuyaou@163．eom 基金项目：四川省应用基础研究重点项目(编号：07JY029．045)． 第 2期 韦吉春等：藏绵羊脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的克隆及序列分析 215 ExTaqDNA聚合酶