溶氧浓度对rhG-CSF工程菌高密度发酵的影响.pdfVIP

药学实践杂志 2011年5月25日第 29卷第3期 JournalofPharmaceuticalPractice，Vo1．29，No．3，May25，2011 溶氧浓度对 rhG—CSF工程菌高密度发酵 的影响 岑 仡 ，童 涌’，杨 峰。(1．上海三维生物技术有限公司，上海 201206；2．第二军医大学无机化学教研室，上海 200433) [摘要] 目的 确定 rhG．CSF工程菌高密度发酵 的最佳溶氧浓度 。方法 通过通入纯氧 ，高密度发酵 的溶氧值可 以精 确控制 。考察不 同溶氧浓度对工程菌的生长 、质粒丢失率 、乙酸积累情况以及 rhG—CSF表达的影响，来确定溶氧 的最佳控制范 围。结果 工程菌生长阶段溶氧控制在 25％ ，诱导后控制在 35％，最有利于菌体生长和外源蛋 白表达 ，最终菌体密度为 (79．6±2．1) L，表达量为 (4O．2±1．2)％。结论 溶氧对工程菌 rhG．CSF高密度发酵有显著影响。 [关键词] rhG—CSF；高密度发酵 ；溶氧 [中图分类号] R966 【文献标志码] A [文章编号] 1006—0111(2011)03—0197—04 Effectofdissolved oxygen on high density fermentation ofE．coltin producing rhG．CSF CENYi，YANG Feng，TONGYong (1．ShanghaiSunwaybioCompany，Shanghai201206，China；2．DepartmentofInorganicChemis— try，SchoolofPharmacy，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China) [Abstract] Objective Tostudythedensityofthedissolvedoxygen(DO)onfermentationofE．coltinproducingrhG-CSF． M ethods PureoxygenwasusedtocontrolDO preciselyandtoobservethegrowthofengineeredbacteria，thelostofplasmids，theac— cumulationofaceticacidfrom differentDO density．Theoptimum densityofDO forfermentationwasdetermined．Results 25％ in growthphaseand30％ afterinductionwasoptimum densityofDOforrhG·CSFexpressionandengineeredbacteriagrowth．Underthese conditions，thewetcellweightreached(79．64-2．1)g／LandtheexpressionofrhG—CSFwas(40．2±1．2)％．Conclusions The growthofengineeredbacteriaandtheexpressionofrhG ·CSFwereinfluencedbythedensityofdissolvedoxygen significantly． [Keywords] rhG—CSF；highdensityfermentation；dissolvedoxygen 粒细胞集落刺激 因子 (G．CSF)是 目前已知血细 3个 因素影 响的研究 ，最终确定 了 rhG．CSF工程菌 胞集落刺激 因子 中特异作用粒系祖细胞 ，促进其 向 pBVQG8／MM294最适 生长 和最 适表 达 的溶 氧浓 成熟中性粒细胞增殖 、分化 ，并维持其功能 、存活 的 度，分别为 25％和35％，为大规模生产 rhG—CSF奠 造血生长因子。它对于治疗 由肿瘤放化疗 、骨髓移 定 了基础 。在确定 了最适溶氧浓度后 ，rhG．CSF工 植所引起的粒细胞减少症具有显著疗效 。由于 程菌高密度发酵最终获得菌体 80g／L，表达量可达 rhG—CSF天然来源非常有限，利用基 因工程重组技