软骨细胞外基质与壳聚糖复合制备组织工程软骨支架及其性能研究.pdfVIP

中华骨科杂志 2011年 8月第 3l器第 8期 ChinJOrthoo，August2011．Vo1．3l，No．8 · 基 础 研 究 · 软骨细胞外基质与壳聚糖复合制备组织工程 软骨支架及其性能研究 杨强 彭江 卢世璧 夏群 马信龙 胡永成 郭全义 汪爱媛 赵斌 张莉 许文静 【摘要】 目的 探讨采用壳聚糖与脱细胞软骨基质复合制备组织工程软骨支架的可行性，检测其 理化性能和细胞相容性。方法 取天然人软骨粉碎，取 100nm~5tzm软骨微丝，脱细胞处理后制备为质 量浓度 l％悬液，与质量浓度2％壳聚糖醋酸溶液按 l：1f重量EL)充分搅拌混合，冷冻干燥制备复合支架。 对支架交联，并进行组织学、扫描电镜、孔隙率及吸水性测定、生物力学评估，MTI法分析支架浸提液毒 性。分离培养犬软骨细胞 ，种植到支架上 ，倒置显微镜 、电镜观察细胞在支架的生长、分化情况。结果 组织学显示支架 中无细胞碎片残 留，II型胶原免疫组化染色阳性。扫描电镜显示支架内孔洞相互连通 似海绵状 ，孔径为(136．2~34．9)m，孔隙率为81．4％±3．5％，吸水性约为 1525．7~129．3％。支架纵 向弹性 模量为(1．940~0．335)MPa。MIF法显示不同浓度支架浸提液与对照培养液吸光度值 比较，差异无统计 学意义 (P0．05)。倒置显微镜观察，细胞在支架上粘附良好 ，扫描 电镜下细胞在支架上均匀分布，呈圆 形或椭圆形，有基质分泌。结论 软骨细胞外基质和壳聚糖复合制备的仿生三维多孔双相支架 ，具有较 高的孔隙率和吸水性，良好 的生物力学特性，无毒 ，生物相容性 良好 ，是组织工程软骨的 良好支架载体 。 【关键词】 软骨；组织工程；细胞外基质；壳聚糖 FabricatiOiland characterizatiOilofanovelcartilageacellularmatrix／chitosan hybrid sea舫 ld for cartilagetissueengineering YANGQiang，咫ⅣGJiang,LUShi—bi,XiaQun，MaXin—long,HuYong- cheng,GuoQuan-yi，WangAi-yuna,ZhaoBin,ZhangLi，XuWen-ring．InstituteofOrthopaedics，Chinese GeneralHospital,Beiiing 100853,China A【bstract】 Objective Toexplorethefeasibilityoffabricatinganovelcartilageacellularmatrix／ehi— tosanhybridscaffoldforcartilagetissueengineering．Methods Humancartilagemicrofilamentsabout1o0 nm一5 ．／Lm werepreparedafterpulverizationandmadeinto1％ suspensionafterdecellularization．TheSUS， pensionwasmixedwith2％ chitosanaceticacidsolution．andthenhybridscaffoldswerefabricatedusinga simplefreeze—dryingmethod．Thescaffoldswerecross—linkedandwereinvestigatedbyhistologicalstaining． SEM observation，porositymeasurement，waterabsorptionrate，biomechaniealproperties，andbiocompatibili— tyanalysis．MTItestwasalSOdonetoassessthecytotoxicityofscaffoldleachingliquor．Caninechondrocytes wereisolatedandseededintothescaffold．Cellproliferationanddifferentiationwereanalyzedusinginverted microscope