基于ITS2序列的女贞子原植物及其混伪品的分子鉴定.pdfVIP

2011第十三卷 第四期 ★vo1．13No．4 摘 要：目的：通过分析女贞子原植物及其混用品和伪品的ITS2序列，探究鉴定女贞及其混伪品 的新方法。方法：采用CodonCodeAligner进行序列拼接 ，MEGA4．1计算女贞及其混伪品的种 内、种 间 的K2P距 离，并基于K2P模型构建NJ树，最后应用Schuhz等建立的ITS2数据库和网站预测二级结 构。结果：女贞的最小种间K2P距离(3．2％)大于种 内最大K2P距离(O．9O％)，NJ树 中女贞的不同来源 样品聚为一支。女贞与其混伪品的二级结构的分子形态均有差异。结论：ITS2序列可以作为鉴定女贞 子原植物及其混伪品的条形码序列，并且该序列在中药材原植物的鉴定中具有很大的潜力。 关键词：女 贞 混伪品 分子鉴定 IrIS2序列 doi：10．3969~．issn．1674—3849．2011．04．012 2010版 《中国药典》记载女贞子LigustriLucidi 混伪品鉴定的文献，指出女贞与小叶女贞果实的微 Fruetus为木犀科植物女贞 LigustrumlucidumAit．的 量元素铁含量差异明显，女贞与水蜡树有原植物 、果 干燥成熟果实。女贞子具有滋补肝肾、强腰膝、明耳 实性状、果实显微 3个方面的鉴别研究。刘杨等 【1通 目、乌须发 、补血虚的功效 ，在放化疗的肿瘤病人中 过聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对女贞与Et本女贞进行 使用，具有护肝、升白细胞 ，增强免疫功能的作用。仝 了成功鉴定。多位学者对女贞与鸦胆子从药材性状、 会娟等 【1综述了2009年以前 l5年间有关女贞及其 显微特征等方面进行鉴别 1。而对女贞子及其混伪 品条形码分子鉴定方面的相关研究尚缺。 收稿 日期 ：2011-06—29 rDNA的ITS2序列长度较短 ，两端 5．8S和26S 修 回 日期 ：2011-08—05 ★ 国家自然科学基金青年基金项 目(8lo0l6o8)：基于全叶绿体基因组分析筛选鸟头属药用植物DNA条形码序列，负责人：韩建萍。 ★★ 通讯作者：韩建萍，中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所副研究员，硕士生导师，主要研究方向：中药资源及分子鉴定研究，E—mail： jphan@implad．ac．an。 644 [D ScienceandTechnology~ModernizationofTraditionalChineseMedine andMateriaMedica] 世界科学技术～中医药现代化★中药研究 (28S)区域保守，使得其具有易扩增，易测序的优点。 buffer(10x)2．51xL、正反 向引物 (2．5M)各 1．OtzL、 韩建萍等6[1应用 ITS2序列可以有效鉴定筋骨草及其 TaqDNA聚合酶 1U (TiangenBiotechCo．，China)、总 近缘种。Chen等[1研究了753个属4800种6600份样 DNA约 1ixL(～30ng)，其余用 ddH20补至251xL。电 品，在种水平的鉴定成功率达到了92．7％，提出将 泳查看 PCR扩增情况，进行双向测序。 ITS2序列作为鉴定药用植物的潜在的标准序列。进 2。 握 堑 一 步研究表明ITS2序列在分别对蔷薇科、大戟科 、菊 获得 的实验测序峰 图利用 CodonCodeAligner 科、豆科、芸香科 、重楼属、景天属、黄芪属、豆蔻属等 (CodonC0deCo．，USA)校对拼接，去除引物区。基于隐 多个科属密切相关种的研究中均取得了好的鉴定效 马尔可夫模型 的HMMer注释方法将所有序列 (包 果 ·。Yao等[17】通过对 5万多份植物样本和 1万多 括下载的序列和实验序列)用 CodonCodeAligner去 份动物样本的研究，显示出ITS2序列在动物界