一个奥利亚罗非鱼雌性特异性SCAR标记的建立.pdfVIP

第 32卷 第 4期 渔 业 科 学 进 展 Vo1．32，NO．4 2 0 1 1 年 8月 PROGRESSIN FISHERY SCIENCES Aug．，2011 一 个奥利亚罗非鱼雌性特异性 SCAR标记的建立 杨 玲 孟庆磊 李 娴 付佩胜 安 丽 董学飒 张龙 岗 刘羽清 (山东省淡水水产研究所 山东省淡水水产遗传育种重点实验室，济南 250117) 摘 要 以奥利亚罗非鱼 Oreochromisaureus为实验材料，通过对 800多条 随机 引物的筛选，获得 了 1个奥利亚 罗非鱼雌性特异性的、长度为 1488bp的 RAPD标记片段 RAPD 。。。 ，经琼脂糖凝 胶 电泳后回收 、克隆、测序，并根据测序结果设计 PCR特异 引物，再经 PCR条件优化，成功地将该 RAPD标记片段转化为 实验结果稳定、操作 简便 的 SCAR标 记 ，即 SCARⅧ 黜。采 用双重 PCR技 术，以mtDNA 16SrRNA基 因片段 为PCR扩增阳性对照，对该标记的有效性在两个群体共 200个个 体 (雌 、雄各 1。0个)中进 行验证 。结果显示，标记检 测结果与表 型性别 的符合度 为 100 。SCA R 标记的获得为奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定及标记辅助选择提供 了有效工具 ，为深入研 究鱼类 性别相关基因及性别决定机制提供 了重要 线索和新的思路 。 关键词 奥利亚罗非鱼 性 别 分子标记 RAPD SCAR 中图分类号 S917 文献识别码 A 文章编号 1000—7075(20l1)040034—07 EstablishmentofafemalespecificSCAR marker inbluetilapiaOreochromisaureus YANG Iing MENG Qing—lei LIXian FU Pei—sheng AN Li DONG Xue—sa ZHANG Long—gang LIU Yu—qing (ShandongProvincialKeyI．aboratoryofFreshwaterGeneticsandBreeding，FreshwaterFisheries ResearchInstituteofShandongProvince，Jinan250117) ABSTRACT A femalespecificrandom amplifiedpolymorphicDNA (RAPD)markerwasob tained in bluetilapiaOreochromisaureusthrough screening800random primers．Thefemale specificDNA fragmentwithalength of1488bpwascloned，sequenced，andconverted intoa SCAR (SequenceCharacterizedAmplifiedRegion)marker，SCAR()F1488．A duplexPCR method wasdevelopedtoamplifySCAR()F1488togetherwitha509一bp—longmtDNA 16SrRNA genefrag— mentwhich served asapositivecontro1．TWO hundred individualsoriginatedfrom 2popula tions。including 100malesand 100 females，wereusedto verifythereliability oftheSCAR markerbyusingtheduplexPCR method．Thesexidentificationtestresultsof200fishshowed 100 accordancewiththeirphenotypicsex．SCAR()