抑制性差减杂交技术（SSH）在植物学研究中的应用.pdfVIP

n C T ^ ABRICULTURAE 华 北农 学报 ·2008，23(增 刊 )：78．83 BOilHLI-SlfflGA 抑制性差减杂交技术 (SSH)在植物学研究中的应用 阎爱华，王冬梅 (河北农业大学 生命科学学 院，河北 保定 071001) 摘要 ：抑制性差减杂交是一种基于转录水平 的杂交技术 ，能将差异表达基因扩增千倍后富集 ，具有高效、灵敏、操 作简单 ，假 阳性率低等特点，已经越来越多的被应用在植物学研究领域。就该技术的原理 、特点及其在植物学方面的 应用研究进展作一简要介绍 。 关键词 ：抑制性差减杂交；差异表达 ；植物学 中图分类号 ：Q32 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2oo8)增刊 一0078—06 ApplicationofSuppressionSubtractiveHybridizationTechniqueinPlantField YAN Ai—hua，WANG Dong—mei (CollegeofLifeScience，AgricuhuralUniversityofHebei，Bnading 071001，China) Abstract：Suppressionsubtractivehybridization(SSH)isahybridizationtechniquebasedontranscriptionallevel，it couldidentifyandcollectdifferentexpressedgenesbyamplifythedifferentgenesover1000tihaes．Becauseoftheadvan- tageofthetechniqueincludinghighefficiency，highsensitiveness，simpleoperationandlow falsepositiverate，itsapplica- tioninplantisbroadlymoreandmore．Thispaperrevieweditsworkingfoundation，charactersandapplicationinplantre- search． Keywords：SSH；Differentexpressedgenes；Botany 植物各种组织细胞 的生物学功能是 由基因调控 1 抑制性差减杂交技术的原理 的，而基因的表达受植物所处的生理时期 、生长状态 以及环境条件等多方面的因素影响。基因按时问和 SSH技术是 由Diatchenko等于 1996年发 明，是 空间顺序 的表达被称为基因的差异表达。植物基因 一 种转录水平上的基于抑制 PCR和差减杂交分离 的差异表达表现在两个方面 ，即基 因表达 的种类和 基因尤其是低丰度表达基因的差异表达技术。该方 数量水平 ，这两方面的变化构成了植物细胞在不同 法运用二级动力学原理 ，通过一次杂交可 以使低丰 生长发育状态，不同组织类型，应对不同逆境条件时 度表达序列得到高于 1000倍 的扩增 ，同时有效抑 的分子调控网络，是调控植物生命活动的核心机制， 制非 目标序列的非特异性扩增。 因此 ，明确不同类型植物细胞在特定 时期 的基因表 SSH需要经过两次差减杂交 ，两次抑制性 PCR 达差异及其调控过程 ，对 阐明生命发生的过程和机 的过程 ，具体步骤如下 ： 理、确定基因功能、分离克隆 目的基因、改良植物性 首先将需要检 测 的样 品 (Tester)和对 照样 品 状具有重要意义 。 (Driver)的mRNA分别转录成 cDNA，然后用酶切成 随着分子生物学实验技术 的不断发