Real-time PCR法定量检测柑橘绿霉病菌对抑霉唑的抗性频率.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 38(6)：561—569(2008) Real—timePCR法定量检测柑橘绿霉病菌 对抑霉唑的抗性频率 陈广进 ，张志芳 ，姜丽英 ，徐发三。，马忠华 ，李红叶 (浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所，杭州 310029； 。浙江省衢州市农业信息和培训中心，衢州 324401；。浙江省衙州市植物保护站，衢州 324401) 摘要 ：抑霉唑被广泛用来防治由指状青霉菌(Penicilliumdigitatum)引起的柑橘绿霉病。已有研究表明，柑橘绿霉病菌对抑 霉唑的抗性由CYP51基因启动子区5个 126一bp转录增强子的简单串联重复和 126一bp转录增强子上 199b·p的特异性片段 插入所引起。基于这2种抗性分子机制，通过设计特异引物和优化条件，建立real—timePCR高通量分子检测技术，用于快 速检测柑橘包装贮藏库中绿霉病菌群体对抑霉唑的抗性频率F ，指导科学用药。 关键词：柑橘绿霉病 ；抑霉唑；杀菌弃廿抗性 ；real-timePCR Real-timePCRassayfordetectionofthefrequencyofimazalil—resistanceof尸el几icf1． 1ium digitatum CHEN Guang-jin，ZHANG Zhi—fang，JIANG Li—ying。，XU Fa．Sna。，MA Zhong—hua ，LIHong—ye (InstituteofBiotechnology，CollegeofAgriculutreandBiotechnology，ZhejinagUniversity， Hnagzhou310029，China；CenterofAgriculutreInformationnadTrainingofQuzhouCity，ZhejinagProvince，Quzhou324401， China；。PlnatProtectionStationofQuzhouCity，ZhejinagProvince，Quzhou324401，China) Abstract：ImazalilisasystemicfungicideusedworldwideforthecontrolofcitrusgreenmoldcausedbyPe— nicillium digitatum ．Uptodate，twomolecularmechna ismsofresistancetohtefungicideimazalilwerefound from尸．digitatumisolatesinZhejinagprovince．Onewasfivecopiesofa126一bptrnascriptionalenhnacerunit inpromoterregionofCYP51gene(resistanttypeI)nadhteohterwasaunique199一bpinsertwihtinhte126一 bprtanscriptionalenhnacerunit(resistanttypelI)．Basedonhtesemechanisms，areal—timePCRassaywas developedtorapidlyquantifyhterfequencyofhteresistance(FR)ofP．digitatuminpahtogensamplescollec— tedrfom storehousesofcitrus． Keywords：Penicillium digitatum；imazalil；fungicideresistance；rea1．timePCR 中图分类号 ：$666；$481．4 文献标识码：A 文章编号：0412-0914(2008)06-0561-09 我国是世界柑橘生产的第三大国，2004年柑 使用杀菌剂是控制柑橘采后腐烂的重要措施 橘产量约 1500万t，仅次于巴西和美国。由指状 之一。我国于2O世纪 90年代初开始广泛应用 青霉菌 (Penicilliumdigitatum)引起的柑橘绿霉病 DMI杀菌剂抑霉唑处理采后柑橘，以防治绿霉病。 是柑橘采后贮藏销售期间的主要病害。包装贮藏