利用RNAi建立脊髓性肌萎缩症的细胞模型.pdfVIP

中南大学学报(医学版) l108 JCentSouthUniv(MedSei) 利用 RNAi建立脊髓性肌萎缩症的细胞模型 杨晓苏，胡益 民，肖波 ，杨期 东，赵 惠敏 (中南大学湘雅医院神经 内科 ，长沙 410008) 【摘要] 目的：应用RNA干扰沉默 SMNI基因的表达建立脊髓性肌萎缩症 (SMA)的细胞模型。方 法：将 pshRNA—SMN1重组质粒转染人骨髓 间充质干细胞 (hMSCs)，经 G418筛选得到能稳定表达 目的 shRNA的单克隆细胞系后将其诱导分化为神经元样细胞 (NLCs)建立 SMA细胞模型组。同期设立转染 重组质粒 pshRNA一0的对照组和未转 染重组质粒的空 白对照组 。观察 NLCs的细胞 形态，采用免疫 细胞 化学染色分析 NLCs的NSE和NF蛋白表达，用RT—PcR和免疫印迹方法检测NLCs的SMNmRNA及其蛋 白 表达。结果：诱导后各组细胞呈典型的神经元样细胞形态且 NSE和 NF蛋 白表达 阳性；其 一SMNmRNA， △7一SMNmRNA及 n—sMN蛋 白表达均较诱导前增加 (P0．05)，但 sMA细胞模型组的，!一SMNmRNA及蛋 白表达仍明显低于对照组(P0．01)；而诱导后△7一SMNmRNA的表达在各组 间差异无统计学意义(P 0．05)。结论 ：SMNlmRNA及其蛋 白被抑制的 MSCs诱导分化 为NLCs后可以作 为 SMA的细胞模型。 [关键词] RNA干扰 ； 运动神经元生存蛋白； 脊肌萎缩症； 人间充质干细胞 [中图分类号] R744 [文献标识码 】 A [文章编号】 1672-7347(2008)12-l108—05 Establishmentofspinalmuscularatrophy cellmodelbyRNAi YANGXiao—SU，HUYi—min，XIAOBo，YANGQi—dong，ZHAOHui—min (DepartmentofNeurology，Xmn~aHospital，CentralSouthUniversity，Changsha410008，China) Abstract： Objective Toestablishspinalmuscularatrophy (SMA)cellmodelbyblocking theexpressionofSMN1genewith shRNA．M ethods TherecombinantSMN1shRNA expressionvec- torwasconstructed．SMAcellmodelwasestablishedbyhumanmesenchymalstemcells(hMSCs)that thevectorwastransfectedintoweredifferentiatedtoneuronlikecells(NLCs)．Atthesametimethe controlgroupswereestablishedthattheshRNA ——0vectorwastransfectedintoand novectorwas transfeeted into．Theexpressionof 一SMN and,57一SMN mRNA wasobservedbyRT—PCR analysis． Theexpressionoffl—SMN proteinwasdetectedbyWesternblot．Results Thecellsofallthegroups wereneuron likecellsafterbeingdifferentiatedandtheprotein expressionofNSE andNF wasposi- tive．Theexpressionof 一SMN andA7一SMN mRNA andproteinofNLCsineachgroupwasupregu— lated(P0．05)，bu