毕业论文--HCV核心区基因片段C70-140的原核表达.doc

学号： 14083400784 毕业设计（论文） 题目： HCV核心区基因片段（C70-140）的原核表达 作 者： 李 颖 届 别： 2012届 系 别： 化学化工学院 专 业： 生物工程 指导老师： 聂东宋 职 称： 副教授 完成时间： 2012年5月20日  摘要 在大肠杆菌中表达HCV核心区基因片段（C70-140）, 构建一个pBVIL-70-140原核表达载体，用于丙型肝炎核心抗原(HCV-cAg)和丙型肝炎抗体(HCV-Ab)联合检测PCR 产物经XhoI和XbaI双酶切后连接到经同样酶切的pBVIL原核表达载体中, 转化大肠埃希氏菌BL21，并以IPTG 诱导蛋白表达，SDS鉴定。结果表明，将目的基因与表达载体pBVIL进行连接，得原核表达载体pBVIL-70-140，该载体转化大肠埃希氏菌BL21后可诱导表达出分子量约为25 KD的重组蛋白。 关键词：丙型肝炎病毒;核心区基因片段(C70-140)；原核表达  Abstract The objective is to express the recombinant HCV core gene fragment (C70-140) in Escherichia coli and build a pBVIL-70-140 prokaryotic expression vector for the hepatitis B core antigen ( HCV-cAg ) and hepatitis C antibodies ( HCV-Ab ) combined detection. HCV core fragment was amplified by RT-PCR and the product was digested by XhoI and XbaI, then the fragment was inserted into an Escherichia coli prokaryotic expression vector pBVIL，and used to transform E. coli BL21. The target protein was expressed in BL21 and induced by IPTG ，and the expressed protein was indentified by SDS –PAGE. We got the pBVIL-70-140 prokaryotic expression vector by connecting the purpose gene and expression vector pBVIL, the result showed that the pBVIL-70-140 prokaryotic expression vector can induce the expression of the recombinant protein molecular weight of about 25KD through the transformation of Escherichia coli. Key words: HCV ; Core gene fragment(C70-140); Prokaryotic expression  目 录 中文摘要…………………………………………………………………………… Ⅰ 英文摘要…………………………………………………………………………… Ⅱ 前言………………………………………………………………………………… 1 一、材料与方法…………………………………………………………………… 3 1、材料………………………………………………………………………………3 1.1实验仪器……………………………………………………………………… 3 1.2实验酶及主要试剂…………………………………………………………… 3 1.3试剂盒………………………………………………………………………… 4 1.4分子量标准…………………………………………………………………… 4 1.5引物…………………………………………………………………………… 4 1.6菌株和载体…………………………………………………………………… 4 1.7实验血浆…………