磁性纳米颗粒直接吸附法固定化糖化酶的研究毕业设计（论文）.docVIP

毕业设计（论文） 题目：磁性纳米颗粒直接吸附法固定化糖化酶的研究 院（系） 化工学院 专 业 生物技术 届 别 2011届 学 号 0714321042 姓 名 周强 指导老师 陈 国 华侨大学教务处印制 2011年 6 月 摘要 本文采用直接吸附法利用Fe3O4磁性纳米颗粒将糖化酶固定，首先研究固定化的条件，测定了固定化的时间、pH以及不同磁流体浓度和酶浓度分别对固定化的影响，用分光光度计测蛋白含量和酶活，两种数据结合然后从中选择最佳条件；利用得到的最佳条件制备出一批固定化酶，研究其特性，依次考察了固定化酶的最适pH，最适温度，pH稳定性，温度稳定性，储存稳定性，重复利用性和酶的动力学参数，并且将固定化酶与游离酶作对比，展示了固定化酶的各种优势。研究得到：在固定时间为16h，pH=6，磁流体浓度为40mg/ml，酶浓度为4mg/ml的时候固定出来的酶同时具有较好的吸附量和较高的酶活；而固定化酶的最适pH为5.4，游离酶的为4.8，固定化酶最适温度为50℃，游离酶的为60℃， 关键词： 糖化酶 固定化酶 磁性纳米颗粒 直接吸附法 Abstract Key words: glucoamylase immobilized enzyme nano-granular magnetic direct adsorption 目录 1综述 5 1.1糖化酶 5 1.1.1糖化酶简介 5 1.1.2糖化酶来源 5 1.1.3糖化酶特性 5 1.1.4糖化酶应用 6 1.2固定化酶 7 1.2.1固定化酶简介 7 1.2.2固定化酶优点 7 1.2.3固定化方法 8 1.2.4固定化酶性质 9 1.3磁性纳米颗粒 10 1.3.1磁性纳米颗粒制备方法 10 1.3.2 磁性纳米颗粒应用领域 10 1.4磁性纳米颗粒固定化酶 11 2．实验材料与方法 12 2.1实验试剂与仪器 12 2.2 2%活化淀粉的制备 13 2.3 测定蛋白含量的方法 13 2.4测定葡萄糖含量的方法 13 2.5直接吸附法固定化糖化酶的条件 14 2.5.1固定时间对固定化的影响 14 2.5.2pH对固定化的影响 14 2.5.3磁流体浓度对固定化的影响 14 2.5.4酶浓度对固定化的影响 15 2.6固定化酶的特性研究 15 2.6.1pH对固定化酶酶活的影响 15 2.6.2温度对固定化酶酶活的影响 16 2.6.3pH稳定性 16 2.6.4温度稳定性 16 2.6.5储存稳定性 17 2.6.6固定化酶的重复利用性 17 2.6.7酶的动力学参数 17 3结论 18 4参考文献 18 5致谢 19 1综述 1.1糖化酶 1.1.1糖化酶简介 糖化酶，全称葡萄糖淀粉酶，又称淀粉葡萄糖苷酶，功能在于从淀粉、糊精或糖原等碳水化合物的非还原性末端释放p-D-葡萄糖。糖化酶是水解淀粉产生葡萄糖的主要酶类，因此被广泛地应用于食品、医药、发酵等工业，具有很高的商业价值，是我国产量最大的酶制剂产品之一。目前，工业中广泛使用黑曲霉、泡盛曲霉等为生产菌株来提取糖化酶。【2.张树政.酶制剂工业!M].北京:科学出版社，1984. 491.】 1.1.2糖化酶来源 糖化酶在微生物中的分布很广，工业上用的糖化酶主要是从黑曲霉、米曲霉、根霉等丝状真菌和酵母中获得，从细菌中也分离到具有热稳定的糖化酶，人的唾液、动物的胰腺中也含有糖化酶。不同来源的淀粉糖化酶其结构和功能有一定的差异，对淀粉颗粒的水解作用的活力也不尽相同。可以产生生淀粉糖化酶的微生物有细菌、真菌等，它们产生的糖化酶水解淀粉的主要产物为葡萄糖、麦芽糖和麦芽二糖。 1.1.3糖化酶特性 1.1.3.1 热稳定性 目前为止尚没有理想的常温条件下水解淀粉的糖化酶产品，工业上都是利用糖化酶的热稳定性进行糖化。一般真菌产生的糖化酶热稳定性比酵母高，细菌产生的糖化酶耐高温性能优于真菌。Clostridium thermohydrosulfuricum糖化酶是目前已报道的糖化酶中耐热最高的酶，在50%的淀粉溶液中，70 ℃条件下酶完全稳定，在85℃处理1h其酶活性仍保持50%，而且这种酶不受EDTA和环状糊精的影响。 1.1.3.2 pH稳定性 一般糖化酶都具有较宽的pH适应范围，但最适pH多为4.5-6.0。在产酶真菌中相比较而言，黑曲霉糖化酶具有较强