毛细管电泳-电致化学发光法测定人尿中脯氨酸和羟脯氨酸.pdfVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究报告 第 6期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 6月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 785 ～788 毛细管电泳 电致化学发光法测定人尿中脯氨酸和羟脯氨酸 薛 　静 　梁 　恒 　李 　甜 　武亚艳 (西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室 ,分离科学研究所 ,西安 7 10049) 摘 　要 　采用毛细管电泳 联吡啶钌电致化学发光法检测了人尿中的脯氨酸和羟脯氨酸 。讨论了联吡啶钌浓 度 、检测电位 、磷酸盐缓冲液浓度和 pH 值 、进样电压和进样时间等实验条件对脯氨酸和羟脯氨酸分离检测的 ( 影响 。在优化实验条件下 ,脯氨酸和羟脯氨酸分别在 0. 008～2 和 0. 0 1～2 mmol/L 范围内呈 良好线性 相关 ) μ 系数 0. 997 ;检出限浓度分别为 2 和 4 mol/L 。测定了人尿中游离脯氨酸和羟脯氨酸以及两者总浓度 , 回收 率 96. 4% ～99. 7% 。 关键词 　脯氨酸 ,羟脯氨酸 ,毛细管电泳 , 电致化学发光 ,联吡啶钌 1　引　　言 ( ) ( ) 胶原蛋白中常含有丰富的脯氨酸 Pro 和羟脯氨酸 Hyp ,其中 Hyp 几乎为胶原蛋白所特有 。在胶 原蛋白代谢中 , Pro通过羟基化形成 Hyp ,胶原蛋白降解释放的 Hyp 从尿中排泄 [ 1 ] 。尿 Hyp 已作为人体 胶原蛋白代谢的生化指标 。人体液 Pro和 Hyp 含量变化与多种疾病有关 ,如骨病 [ 2 ] 、癌症 [ 3 ]和慢性尿毒 症 [ 4 ] 等 ,因而同时检测尿 Pro和 Hyp 具有重要的临床诊断价值 。尿 Pro和 Hyp 以游离态和结合态两种 形式存在 ,可直接测定尿中游离 Ρro和 Hyp 。通过样品处理 、水解尿蛋白后 ,还可测定尿中游离态和水 解的 Pro和 Hyp (简称为总 Pro和 Hyp ) ,这有助于为全面诊断病情提供参考 。传统检测 Pro和 Hyp 的方 ( ) [ 5 ] ( ) [ 6 ] 法有气相色谱法 GC 和液相色谱法 HPLC ,但存在耗时、成本高和色谱柱易污染等缺点 。 ( ) ( ) 2 + ( ) 毛细管电泳 CE 分离 联吡啶钌 [Ru bp y 3 ]电致化学发光 ECL 检测是近年来发展的一种新方 ( ) 法 简称 CEECL 。H arvey在 1929年首次成功地观察到了碱性水溶液中鲁米诺的 ECL ,但直到 1987 年才发现 Ru ( bp y) 2 + 烷基胺的 ECL 强度与胺的结构有关 ,并开始用于分析化学 [ 7 ] ; 1997 年 Sweedler 3 [ 8 ] ( ) 2 + β [ 9, 10 ] 等 最早把 CE与 Ru bp y 3 ECL 结合检