胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定.pdfVIP

· 1088 · 医学综述 2012年4月第 18卷第7期 MedicalRecapitulate，Apr．2012，Vo1．18，N0．! 胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定 王 勇，马武华 ，钟 鸣，王可佳 (广州中医药大学第一附属医院麻醉科 ，广州 510405) 中图分类号：R614；R743．31 文献标识码 ：A 文章编号：1006~084(2012)07—1088-03 摘要：目的 建立较理想的sD大鼠胎鼠海马神经细胞体外原代培养方法。方法 孕18d(El8) 免疫组化试剂盒 (即用型) sD大鼠的胎鼠，采用胰酶消化和机械分离相结合的方法进行海马神经元的原代无血清培养。结果 (武汉博士德生物工程有限 在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化，并能形成典型的神经细胞网络。结论 该培养技术 公司)。 是海马神经细胞体外培养的理想方法。 关键词：胎鼠；海马神经元；原代培养 1．1．3 试剂 的配制 种植 PrimaryCultureandIdentificationofHippocampalNeuronsofFetalRatNeurons WANG ，MA 培养液：高糖型 DMEM／F12 Wu—hua，ZHONGMing，WANG~-jia．(DepartmentofAnesthesiology，theFirstAffliatedHospitalofGuang- (1：1)培养基90％，胎牛血 zhouUniversityofTraditionalChineseMed如ine．Guangzhou510405，China) Abstract：Objecfive Toestablishabetterprimaryculturemethodfortheprimarycultureofrhipocam— 清 10％。无血清培养液：高 palneuronsofSD fetalrats．Methods Trypsindigestionandmechanical dissociationwereadoptedtocon— 糖型DMEM／F12(1：1)培养 ductmonolayerprimarycuhure．Results Underthecultureconditioninvitro．fetalratneuronsshowedsimi— larofrm propertiestotheircounterpartsinvivoandtypical nervefibernetwasfomr ed．Conclusion This 基98％，B272％。 techniqueisan idealtoolofrcultureinvitroforneuronsofhippoeampal tissue． 1．2 方法 Keywords：Fetal rat；Hippocampalneurons；Primary culture 1．2．1 培养板的包被 取 海马是神经元高度集中的部位，具有中枢神经 配置好的50 g／mL多聚赖氨酸溶液800 加入6 系统的典型特性，在学习、记忆、情绪反应及 自主神 孔培养板中，轻轻晃动，使多聚赖氨酸溶液覆盖培养 经功能等方面发挥重要作用。而海马又是癫痫、缺 板或培养瓶底面，置37℃，5％CO 培养箱 内放置过 4／缺氧、神经变性疾病 的主要病灶。神经元细胞培 夜，吸弃多余的多聚赖氨酸溶液，并用PBS轻轻荡洗 养模型是研究神经元发育分化、神经再生、神经疾病 两次，置培养箱中备用。 的发生机制等重要的实验模型llJ。海马细胞的原代 1．2．2 取材 取孕 18d的SD大鼠，将其颈髓横断 培养方法文献报道不一，总体可以分为有血清培养 后迅速皮肤消毒，切开腹部皮肤和腹膜，将子宫完全 和无血清培养两种。有血清培养，血清可以提供细胞 游离后剪开肌层和胎膜，取出胎鼠，剪断脐带后浸泡 生长所必需的营养成分，可以促进细胞的增生和DNA 于装有 D