I型胶原蛋白的提取及其结构表征.pdfVIP

第 28卷第6期 苏 州 大 学 学 报 (工 科 版) V0J．28 No．6 2008年 12月 JOURNALOFSUZHOUUNIVERSITY(ENGINEERINGSCIENCEEDITION) Dec．2O08 文章编号：1673—047X(2008)一06—0063—04 I型胶原蛋白的提取及其结构表征 朱 亮，闻荻江 (苏州大学材料工程学院，江苏 苏州 215021) 摘 要：采用酸膨胀一胃蛋 白酶降解的方法，以新鲜猪皮为原料提取 I型胶原蛋 白，主要研究了酶的 加入量和提取时间对提取效率的影响。并利用IR对胶原结构进行鉴定，同时辅 以DSC和UR检测 进行分析，并且与市售的SigmaI型胶原比较，证实提取物为I型胶原蛋白，且很好地保持了I胶原 的3股螺旋结构。 关键词：猪皮；I型胶原蛋白；提取；表征 中图分类号：rs59 文献标识码：A 0 引 言 胶原蛋白是一种重要的结构蛋白和细胞外基质成分，它主要存在于动物组织中，起着支撑器官、保护基体 的功能，约 占哺乳动物体内蛋白质总量的25％一30％Eli。胶原蛋 白具有特殊的3股螺旋结构，这赋予了它可 降解、组织相容性和止血性等优 良的生物学特性，因此胶原蛋白在组织工程领域有着比较广泛的应用 。 胶原是一个蛋 白质家族，已经发现 l8或 l9个成员-lJ，其中I型胶原含量最多，约为生物体胶原总量的 90％，因此对它的研究以及相关的生物材料应用也最为广泛。I型胶原在生物材料领域的广泛应用促使它的 提取成为 目前的一个研究热点，根据 目前的报道，多数是从牛跟腱和鼠尾腱中提取I型胶原蛋白 ，原料来 源有限，不适合市场化的需求。中国是畜牧业大国，但是 目前对于猪皮的利用非常肤浅，利用猪皮提取I型胶 原蛋白可以很好地提高猪皮的利用价值，另外猪与人之间的同源性较牛、鼠等更好，从猪皮中提取的胶原制备 生物材料应用于人身体中不会产生太大的排异反应。因此利用丰富廉价的猪皮资源来提取 I型胶原可能会 在未来成为一种更加经济、实用的方法。 本文采用酸膨胀 一胃蛋白酶降解法，从猪皮中提取 I型胶原蛋 白。并研究了酶的加入量以及提取时间对 提取效率的影响，用 IR、uV一光谱以及DSC检测分析，与标准的SigmaI型胶原蛋白对比。 1 试验部分 1．1 主要仪器、试剂与原料 紫外分光光度计 (CARY50，美国)，红外光谱仪(Nicolet5700，美国)，差示扫描量热仪(CDR一4P，中国)。 胃蛋白酶(1：3000，Amresco)，柠檬酸(cA)(分析纯)，脱脂剂 (丙酮：10％的纯碱溶液=1：99的混合液，实验 室 自配)，I型胶原(SigmaI，USA，生化级)。新鲜成年猪皮 (苏州欧尚超市有限公司)。 1．2 胶原蛋白的提取 1．2．1 猪皮的预处理 取新鲜猪皮，除去皮下脂肪，切成0．5cm×0．5cm的碎皮块，加入 10％NaC1溶液中浸泡20h，以去除盐溶 性蛋白和其他可溶性杂质。用蒸馏水多次冲洗碎皮块，然后将碎皮块装人烧瓶中，加入脱脂剂 (实验室 自 收稿 日期：2008—08—22 作者简介：朱 亮(1983一)，男，硕士研究生，主要研究方向为生物材料结构与性能。 苏州大学学报(工科版) 第28卷 制)，置于恒温水浴缸中80min，保持温度为32％左右。再用蒸馏水充分漂洗。于冰箱中4~C下晾干备用。 1．2．2 酸酶结合提取 将预处理过的猪皮原料加入到0．05mol／L含有胃蛋 白酶的柠檬酸溶液(pH2—3)中，室温下缓慢搅一段 时间，用2—4层医用纱布过滤留取滤液。 1．2．3 盐析与离心分离 向滤液中直接加入磨细成粉状的NaC1进行盐析(NaCI最终浓度 2．0mol／L)，搅拌20min后放于冰箱中 4~C下静置20h。离心分离得到粗的胶原蛋白沉淀。 1．2．4 胶原的纯化 将离心得到的胶原沉淀溶解在0．05moL／L的柠檬酸溶液中，以蒸馏水为透析液透析2d(透析袋尺