PCR-RFLP技术分析沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性.pdfVIP

}72 N4。．絮 J 盔 gAg． Bi。懿。i盖。 20Doe8c年．。1220@月 文章编号 ：1008—3464 (2008)04—0372—06 PCR—RFLP技术分析沼气池厌氧活性污泥 细菌的多样性 蒋建林h ，周权能 ，车志群 。，邓珍琴 ，武波 。’。 (1 广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁 530005； 2 微生物及植物遗传工程教育部重点实验室，广西 南宁 530005； 3 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，广西 南宁 530005) 摘要 ：应用 PCR—RFLP和 rRNA分析法研究了户用沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性。采用直接提取 法提取了户用沼气池微生物宏基因组 DNA，构建 了细菌的 16SrDNA克隆文库 。随机挑取了 144个准确含 有 16SrDNA 的阳性克隆进行PCR-RFLP分析，聚类得到46个 OTUs(operationaltaxonomicunits)，其中 3个 OTUs是优势类群 ，分别 占14 ，lO 和9 ，21个 OTUs只含有单个克隆。随机挑取了26个克隆进 行测序 ，并构建了系统发育进化树。结果表明：农村户用沼气池中细菌种类较为丰富，占优势的类群分别 为 Firmicutes(28 )、Deltwproteobacteria (18 )和 Bacteroidetes(17 )，大多数 16SrDNA序列与 GenBank数据库 中未培养细菌相似性最高 (91 ～99 )，为进一步研究、利用沼气池能源提供 了基础资 料 。 关键词 ：沼气池 ；16SrDNA；PCR—RFLP；细菌多样性 中图分类号 ：Q938．1 文献标识码 ：A Bacterialdiversityin householdbiogasdigester sludgeanalyzedbyPCR_RFLP JIANG Jian一1in ，ZHOU Quan—neng， ，CHEZhi—qun ，DENG Zhen—qin ，WU Bot’。 (1 CollegeofLifeScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China； 2 TheKeyLaboratoryofMinistryofEducationforMicrobialandPlantGeneticEngineering，Nanning530005，China； 3 GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourceConservationandUtilization，Nanning530005，China) Abstract：ThemoleculardiversityofbacteriawasanalyzedbyPCR—RFLP and 16SrDNA clone librarywasgenerated from ahouseholdbiogasdigester．TotalcommunityDNA wasextractedusing directmethod．which yielded highmolecularweightDNA forsamples．144cloneswererandomly selectedforamplification oftheir16SrDNA，PCR productswere digestedwith restriction enzymes (尺sa IandMsp I)and46operationaltaxonomicunits (OTUS)wereobtained，threemost abundantOTUsaccounting for 14％，10 and 9 ofal1thebacterial16S rDNA clones， respectively．26 clones were sequenced and compared with allnucleotide se