高分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶血性弧菌.pdfVIP

中国科技论文在线 高分辨率熔解曲线分析法检测食源性副溶 血性弧菌# 1 1 1 2 1 1** 章丽 ，余以刚 ，赖富饶 ，杨锡洪 ，吴晖，肖性龙 5 （1. 华南理工大学轻工与食品学院，广州 510640； 2. 广东温氏佳润食品有限公司，广东 云浮 527400） 摘要：为建立一种快速检测鉴定海产品中常见的副溶血性弧菌的 HRM （高分辨率熔解曲线） real-time PCR 法，以 tox R 为靶基因，结合特异性引物，通过优化反应体系及条件，进行特 异性验证，敏感性分析及重复性评价，并初步应用于 90 份送检的鲜活海产品样本的检测。 10 特异性试验表明，该方法能选择性检测副溶血弧菌，Tm 值为 76.64℃±0.57；而与创伤弧菌、 霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、弗氏志贺菌等多种海产品中常见的食源性病原菌没 有交叉反应。灵敏度试验表明，该方法最少可检测 tox R 基因重组质粒的浓度为 3.50×102 copies ／ml 。重复性试验表明，同一样品于试验内及试验间的平均Tm 值分别为 76.53℃±0.35 和 76.74℃± 0.52 ，变异系数分别为 0.56±0.42 ％和 1.11±0.73 ％。通过对90 份送检的鲜活海 15 产品样本的检测，证实该方法可以使阳性检出率从国标法的 14.44% 提高至 18.89%。本研 究所建立的副溶血性弧菌 HRM real-time PCR 法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点， 能应用于食品样本的检测，具有快速、简便、成本低廉的特点，具有很好的研究价值和应用 前景。 关键词：食品质量与安全；副溶血性弧菌；高分辨率熔解曲线；检测；荧光 20 中图分类号：TS207.4 Rapid detection of Vibrio parahaemolyticus by real-time PCR using high resolution melting curve analysis 1 1 1 2 1 1 ZHANG Li , YU Yigang , LAI Furao , YANG Xihong , WU Hui , XIAO Xinglong 25 (1. College of Light Industry and Food Science, South China University of Technology, GuangZhou 510640; 2. Guangdong Wen’s Caren Food Co., Ltd., GuangDong YunFu 527400) Abstract: A rapid real-time PCR method for detecting Vibrio parahaemolyticus by high resolution melting curve analysi