混合油脂补料发酵提高多杀菌素的产量.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（８）：５５５９ 混合油脂补料发酵提高多杀菌素的产量 王美玲　薛超友　赵方龙　卢文玉 （天津大学化工学院　天津　３０００７２） 摘要　通过补加植物油（菜籽油、玉米油、豆油）、油酸甲酯、玉米浆，考察其对多杀菌素发酵产量 的影响。结果显示，在９６ｈ补加３％的混合油脂（油酸甲酯∶菜籽油＝２∶１），同时在９６ｈ和 １４４ｈ分 别补加１％的玉米浆可使多杀菌素的产量提高２．１１倍，发酵单位达到８０４．５９ｍｇ／Ｌ，为实现工业 化生产奠定基础。 关键词　补料分批发酵　多杀菌素　混合油脂　刺糖多孢菌 中图分类号　Ｑ８１９ ［７］ 　　多杀菌素（ｓｐｉｎｏｓａｄ）是刺糖多孢菌发酵生成的次 Ｗａｎｇ等 根据阿维菌素产生菌阿维链霉菌 （Ｓ． 级代谢产物，因其杀虫广谱性、对非靶目标和环境的安 ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）可以利用廉价碳源淀粉，将 Ｓ．ｓｐｉｎｏｓａ和Ｓ． 全性以及良好的可降解性获得了１９９９年的美国“总统 ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ进行种间融合，高产融合菌株多杀菌素产量 ［１］ 为２５ｍｇ／Ｌ较原始菌株提高４４７．２２％；目前国内所报道 绿色化学品挑战奖” ，是应用广泛的生物杀虫剂。多 杀菌素属聚酮类抗生素，但与常见Ｉ型聚酮不同，其内 的多杀菌素的产量一般都低于本文通过补料方法得到 ［２］ 的８０４．５９ｍｇ／Ｌ的产量。 含有３个环内分子间ＣＣ键 。在聚酮合成酶（ＰＫＳ） 的作用下，以丙酸为起始单元，按照ＡＡＰＡＡＡＡＡ 　　植物油被广泛应用于提高抗生素的产量，卞晨光 ［８］ ＡＡ（Ａ乙酰，Ｐ丙酰）的顺序逐步缩合形成聚酮链，再 等 发现在摇瓶中添加豆油后红霉素的产量从３０３８ ［３］ ［９］ 由硫酯酶催化环化反应生成四元环 ，并分别在 Ｃ９ Ｕ／ｍｌ（不加豆油）提高到５２２１Ｕ／ｍｌ；Ｐａｒｋ等 发现以 位、Ｃ１７位的羟基位连接上鼠李糖和福乐糖胺使其具有 ７ｇ／Ｌ的豆油替代淀粉作为碳源时Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．６６２１ ［４］ ［１０］ 生物活性 。多杀菌素的主要成分为组分 Ａ和组分 合成头霉素Ｃ的产量提高４．７倍；Ｖｕｃｅｔｉｃ等 添加油 Ｄ，Ａ组分约占８５％～９０％，Ｄ组分约占１０％～１５％，两 酸甲酯使Ｓ．ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ代谢多烯 Ｈ８５的产量提高 者的主要区别在于Ｃ６，在Ｃ６的基团分别为氢和甲基。 ４０％。而不同油或酯类对多杀菌素发酵产量的影响至 　　目前，制约多杀菌素实现产业化和广泛推广应用 今没有报道，基于多杀菌素的合成途径，以及其他抗生 的主要问题在于生产成本高，发酵工艺复杂，发酵效能 素的合成过程，本文尝试采用添加植物油、油酸甲酯、 低。培养基优化和菌株改造是目前国内多杀菌素研究 玉米浆以提供多杀合成的前体和能量，并大幅提高了 ［５］ 多杀菌素发酵单位。在此基础上，探讨多杀菌素发酵 的重点，李能威等 通过单因素、多因素试验和２次正 交试验获得最优发酵培养基，使多杀菌素产量达到 过程中各个参数的变化趋势，为多杀菌素的开发研究 ［６］ 提供指导。 ３９５．５４ｍｇ／Ｌ，较对照提高６２．５％。Ｌｉａｎｇ等 通过紫 外线诱变筛