五、影响荧光强度的因素.ppt

第4章 分子发光分析 分子发光分析法教学要求 掌握分子荧光、磷光和化学发光的产生机理；掌握激发光谱和发射光谱特征 掌握荧光与分子结构的关系以及溶液荧光强度的影响因素 掌握荧光定量测定方法 了解荧光、磷光和化学发光分析仪器的一般结构 了解分子发光分析的应用前景 分子发光 处于基态的分子吸收能量（电、热、化学和光能等）被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回至基态并发射出光子，此种现象称为发光。 发光分析包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 荧光、磷光为光致发光。 第一节 荧光和磷光的基本原理 一、分子荧光和磷光的产生 1.分子能级图 单重态与三重态 处于分子基态单重态中的电子对，其自旋方向相反，当其中一个电子被激发时，通常跃迁至第一激发态单重态轨道上，也可能跃迁至能级更高的单重态上。这种跃迁是符合光谱选律的，如果跃迁至第一激发三重态轨道上，则属于禁阻跃迁。 单重态与三重态的区别在于电子自旋方向不同，激发三重态具有较低能级。 单重态与三重态 单重态分子具有抗磁性，其激发态的平均寿命大约为10-8s； 而在三重激发态中，两个电子平行自旋，三重态分子具有顺磁性，其激发态的平均寿命为10-4～ 1s以上。 2. 分子的去活化过程（去激发过程）（Deactivation） 处于激发态的电子不稳定，通常以辐射跃迁方式或无辐射跃迁方式再回到基态。 辐射跃迁主要涉及到荧光、延迟荧光或磷光的发射。 无辐射跃迁 无辐射跃迁方式 （1)? 振动弛豫 它是指 在同一电子能级中，电子由高振动能级转至低振动能级，而将多余的能量以热的形式发出。发生振动弛豫的时间为10-12s数量级。 （2)? 内转移 当两个电子能级非常靠近以至其振动能级有重叠时，常发生电子由高能级以无辐射跃迁方式转移至低能级。 图中指出，处于高激发单重态的电子，通过内转移及振动弛豫，均跃回到第一激发单重态的最低振动能级。 无辐射跃迁方式 （3）?????? 系间跨跃 指不同多重态间的无辐射跃迁，例如S1→T1就是一种系间跨跃。通常，发生系间跨跃时，电子由S1的较低振动能级转移至T1的较高振动能级处。有时，通过热激发，有可能发生T1→S1，然后由S1发生荧光。这是产生延迟荧光的机理。 （4）?? 外转换 指激发分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强度减弱甚至消失。这一现象称为“熄灭”或“猝灭”。 辐射跃迁方式 （1） 荧光发射 分子电子从第一激发单重态(S1)的最低振动能级在很短时间跃迁到基态(S0)各振动能层时所产生的光子辐射称为荧光（S1 → S0）。 由于各种去活化过程的存在，荧光辐射能通常要比激发能量低，或者说，荧光波长大于激发波长（Stokes效应）。 不论电子开始被激发至什么高能级，最终将只发射出波长为λ3的荧光。 荧光的产生在10-6-10-9s内完成。 辐射跃迁方式 （2） 磷光发射 由第一激发单重态的最低振动能级，有可能以系间跨跃方式转至第一激发三重态，再经过振动驰豫，转至其最低振动能级，由此激发态跃回至基态时，便发射磷光，这个跃迁过程（T1→S0）也是自旋禁阻的，其发光速率较慢，约为10-3-10s。 因此，这种跃迁所发射的光，在光照停止后，仍可持续一段时间。在低温下才能看到。 荧光与磷光的区别： 荧光是由第一激发单重态最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的； 10-6-10-9s S1(ν＝0) →S0 而磷光是由第一激发三重态的最低振动能层至基态各振动能层间跃迁产生的。 T1 (ν＝0) →S0 寿命10-3-10s，在光照停止后，仍可持续一段时间。 二、荧光量子效率 荧光量子效率也叫量子产率或荧光效率，它表示物质发射荧光的能力，通常用下式表示 二、荧光量子效率 在产生荧光的过程中，涉及到许多辐射和无辐射跃迁过程，如荧光发射、内转移，系间跨跃和外转换等。很明显，荧光的量子效率，将与上述每一个过程的速率常数有关。 二、荧光量子效率 若用数学式来表达这些关系，得到 式中kf为荧光发射过程的速率常数，?ki为其它有关过程的速率常数的总和。 凡是能使kf 值升高而使其它ki值降低的因素，都可增强荧光。 二、荧光量子效率 实际上，对于高荧光分子，例如荧光素，其量子产率在某些情况下接近1，说明?ki很小，可以忽略不计。 一般来说，kf主要取决于化学结构，而?ki则主要取决于化学环境，同时也与化学结构有关。 磷光的量子产率与此类似。 三、激发光谱曲线和荧光（磷光）光谱曲线 荧光和磷光均为光致发光，有两种特征光谱，激发光谱及发射光谱。 1.荧光激发光谱 固定测量波长为荧光（或磷光）最大发