日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗LSA兔血清的交叉反应分析.pdfVIP

维普资讯 中国寄生虫病防治杂志 2004年 4月 第 17卷第 2期 ChinJ ParasitDisCon April2004， Vo1．17，No．2 · 论 著 · 日本血吸虫不同发育阶段抗原与抗 LSA兔血清的交叉反应分析 邓振钦 ，秦 志强孙 ，曾庆仁。，胡维新 (1．湖南省益阳市刘家湖血吸虫病防治站，湖南益阳413048；2．中南大学湘雅 医学院分子生物学研究中心；3．中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室) 【摘要】 目的 为进一步阐明水蛭与 日本血吸虫抗原交叉性机理提供依据。 方法 制备 日本血吸虫子胞蚴抗原、尾 蚴抗原、肝期童虫抗原、雌(雄)成虫抗原、虫卵抗原，采用 Westernblot方法对制备的日本血吸虫不同发育阶段抗原与水 蛭可溶性抗原(LSA)免疫兔血清分别进行免疫印迹反应，分析其交叉性。 结果 LSA免疫兔血清能识别 日本血吸虫 不同发育阶段抗原，且所识别的抗原成分有明显差异 ，雌性成虫抗原和雄性成虫抗原分别有 3条和 2条蛋 白组分可被 LSA免疫血清识别，而不含抗虫卵和抗尾蚴抗体。 结论 在 LSA成分中与血吸虫的共同成分主要存在于成虫中， LSA免疫血清 中含有较多的抗雌性成虫抗体 ，而雄虫次之 。 【关键词】 水蛭 ；可溶性抗原；Western印迹 ；血吸虫，日本 ；交叉反应 【中图分类号】 R383．24 【文献标识码】 A 【文章编号】 i001—6627(2004)02—0120—03 水蛭属于环节动物门，蛭纲 ，无吻蛭 目，医蛭科 ，学 重约 2．5kg的新西兰兔 ，每兔感染血吸虫尾蚴3000 名 日本水蛭 (ChirudonipponiaWhitman，1886)，别名 尾，感染后第 45d剖杀冲虫。用生理盐水漂洗虫体 水蛭 (Leech)和稻 田水蛭_】]。有学者认为环节动物 门 后，将血吸虫分离出旱、 成虫分别置玻璃匀浆器中匀 从扁形动物 门进化而来_2]。有文献报道属于环节动物 浆 20min，4℃冷浸过夜 ，次 日4℃，10000r／min离心 门的蚯蚓与血吸虫之 间存在共同抗原 ，并用于血吸虫 20min，上清即为血吸虫成虫可溶性抗原(si旱A和 Sj 病免疫保护研究_3“]。但水蛭与血吸虫是否存在共 同 A)。测定蛋 白浓度 ，Sj旱A一4mg／ml；si A一2．1 抗原 的研究 尚未见报道。为此 ，作者制备 了水蛭可溶 mg／ml，置一20℃保存 。 性抗原 (Leechsolubleantigen，LSA)，并采用Western 2．3 日本血吸虫 14d肝期童虫抗原的制备 取体重 blot技术对 LSA与 日本血吸虫病患者血清作 了交叉 约 2．5kg新西兰兔 ，每兔感染血吸虫尾蚴 10000余 反应分析 ，证 明在血吸虫病患者血清 中存在较多的抗 尾 。感染后第 14d剖杀动物，用 3．8 枸橼酸钠溶液 LsA抗体[5]。为进一步 阐明其交叉机理，本研究用 灌注冲虫，从肝 门静脉收集童虫，灭菌生理盐水漂洗 LSA免疫血清与 日本血吸虫 5个不同发育阶段可溶 后 ，置玻璃匀浆器匀浆 15min，超声粉碎 5min，10000 性抗原的交叉性进行了分析 。 r／min低温离心 15min，取上清即为 14d肝期童虫 ● (juvenile)抗 原 (siJA)。测定蛋 白浓度为 3．46mg／ 材料和方法