日本血吸虫组织蛋白酶L家族1个新基因的克隆与序列分析.pdfVIP

· 2404 · 中华医院感染学杂志 2011年第 21卷第 12期 ChinJNosocomiolVo1．21No．122011 论 著 日本血吸虫组织蛋 白酶 L家族 1个新基因的 克隆与序列分析 陈奕慧 ，李孜。 (1．广州医学院第二附属医院医院感染管理科 ，广东 广州 510260；2．广州医学院病原生物学教研室，广东 广州 510182) 摘要：目的 克隆与分析 日本血吸虫组织蛋 白酶L样(SjCLs)基因全长 eDNA序列 ，为进一步研究其功能奠定基 础。方法 提取 日本血吸虫成虫总RNA，经RT-PCR扩增获得 eDNA序列；将 目的片段连接至pMD18一TSimple 载体上 ，连接产物转化大肠埃希菌，通过酶切和测序鉴定重组质粒 ；利用生物信息学软件分析序列的开放阅读框 、 蛋 白序列的同源率和功能区。结果 以成虫总RNA为模板进行RT-PCR，得到一段长为 996bp的eDNA片段， 该片段含有完整读码框 ，该阅读框编码 的蛋 白含有 331个氨基酸残基 ，分子量为 38．3kDa，命名为 SjCLs；序列 比 对分析发现该蛋 白氨基酸序列与 SjCL2同源率最高，达到 89．1 ；进化树分析发现 SjCLs与 SjCL2亲缘关系也 最近；SjCLs具有类似于 SjCL2的N端信号肽，可能经加工后分泌到细胞外；两者所预测的功能基序及三维构象也 基本相同。结论 SjCLs具有组织蛋 白酶 L的基本特征，从而证明研究获得组织蛋白酶 L基因家族的一个新成员。 关键词 ：日本血吸虫；组织蛋 白酶 ；基 因；克隆；序列；分析 中图分类号 ：R383．24 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—4529(2011)12-2404—04 Cloneandsequenceanalysisofanewschistosomajaponicumcathepsin L familyproteasegene CHEN Yi—hui ．LIZi (、 The2ndA{{tiiatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou，Cmangdong510260，China) Abstract：OBJECTIVETocloneandanalyzethecDNA ofSchistosomajaponieum cathepsinL-likeproteasegene (SjCLs)，whichlaysafoundationforfurtherinvestigationofthephysiologicalfunctionofSjCLs．METHODS TotalRNA wasextractedfrom adultSchistosomajaponicum．eDNA wasobtainedfrom RT-PCR andthencloned intothepMD18一T Simplevector．Therecombinantconstructwasconfirmedbyrestrictionendonucleasedigestion andDNA sequencing．Theopenreadingframe(ORF)oftheSjCLseDNA sequence，theaminoacididentityand thefunctionalregionsofproteinsequencewereanalyzedbybioinformaticssoftware．RESULTSA 996bpcDNA fragmentwasobtainedbyRT—PCR．ThelongestORF in theeDNA sequenceencodesaputativeproteinof331 aminoacids．Theputativeproteinwithmolecularw