β-酪蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

中国实验诊断学 2011年 8月 第 15卷 第 8期 文章编号：1007—4287(2011)08—1285—03 I3一酪蛋 白单克隆抗体的制备及鉴定 宋 芳，周 玉 ，卢士英，任洪林，李岩松，柳增善，刘文迪，郝亚明 (人兽共患病研究教育部重点实验室，吉林大学畜牧兽医学院，吉林 长春 130062) 牛奶具有丰富的营养价值，牛奶中含有多种人 类鉴定试剂盒购 自洛阳赛尔维公司；8周龄雌性健 类赖以生存的营养素，包括水、蛋 白质、脂肪、碳水化 康 BALB／e小鼠购 自吉林省长春市生物制品所，本 合物、矿物质、维生素等，是人类最理想的天然食品。 实验室饲养；小鼠骨髓瘤细胞 SP2／0，由本室保存； 然而近些年来，随着乳制品产量的逐渐上升，乳品掺 其他试剂均为分析纯。 假现象也时有发生，严重危害消费者健康。牛奶中 BIO—RADModel680酶联免疫检测仪 (uSA)；二 最重要的营养指标是蛋 白质，蛋 白质的传统测定方 氧化碳培养箱(SANYO)；倒置显微镜 (Olympus)；AK． 法是凯氏定氮法，该方法只能测出氮的总量而不能 TApurifier100(GE)；lmL的A蛋白层析柱(上海悦克 确定氮的来源和种类，所以存在一定的缺欠，这使得 生物技术有限公司)；离心机 (科大中佳公司)；移液 不法商人将低价含氮物质如尿素、三聚氰胺、硝酸 器(Thermo)；96孔酶标板(JET)；96孔、24孔、6孔细 盐、亚硝酸盐、白矾、豆浆等…掺入牛奶中，以达到牛 胞培养板(美国Costar公司)。 奶 中蛋 白质含量的检测标准。 1．2 动物免疫 牛奶中的蛋 白质是奶中主要含氮物质，含量为 』3酪蛋 白的分子量为24OOO，属于大分子物质， 2．8％一3．8％，其中95％是乳蛋 白质，牛乳蛋 白质中 因此可以直接刺激动物机体产生免疫反应。免疫方 大约80％是酪蛋 白，J3．酪蛋 白在酪蛋 白中比例恒定， 案如下：本试验采用足垫免疫方法，首次免疫用J3一酪 结构相对稳定 j。因此，如果能直接检测牛奶中l3． 蛋白(1g／mL)与弗氏完全佐剂各200 乳化后免 酪蛋 白的含量，可使得在牛奶中添加含氮类非食品 疫6—8周龄 BALB／c小鼠3只，每只注射 5OttL；一 添加剂的行为变得毫无 “意义”。 周后第二次免疫，用 j3．酪蛋 白(1btg／mL)与弗氏不 目前，牛奶中J3．酪蛋 白的检测方法有酪蛋 白等 完全佐剂各200 乳化后注射，每只50 ；一周后 电点沉淀法 J、毛细管电泳法 4【J、酶联免疫吸附测定 再进行第三次免疫，剂量与方法同第二次免疫；第三 法 J等，这些方法的缺点是依靠昂贵的仪器设备和 次免疫后一周检测小鼠血清效价，融合前3天用不 专业化的实验操作人员，不便以普及和推广。基于 加佐剂的I3．酪蛋 白抗原腹腔注射加强免疫，50ug／ 单克隆抗体的ELISA检测方法具有特异性强、操作 只。 简单、不需要昂贵的仪器设备和专业化的实验操作 1．3 血清效价检测 人员等优点。本试验制备了J3一酪蛋 白的单克隆抗体 小鼠断尾进行尾尖采血，4~C，3000r／min离心 并对其特性进行了鉴定，为牛奶中蛋 白质的ELISA 5min，取上清。利用间接 ELISA方法检测血清效 检测方法奠定基础。 价，同时设阴性和空 白对照，选取血清效价大于 8 1 材料和方法 000的小鼠进行细胞融