液相色谱串联质谱法测定化妆品中的9种禁用芳香胺.docVIP

液相色谱串联质谱法测定化妆品中的9种禁用芳香胺 徐颖1( 肖海龙2 蔡曹盛1 刘永丰1 (1.北仑出入境检验检疫局， 宁波 315800; 2.杭州市质量技术监督检测院， 杭州 310019） 摘要 建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定化妆品中联苯胺、2,4,5-三甲基苯胺、3,3-二氯联苯胺、3,3-二甲基联苯胺、4,4-二氨基二苯醚、4,4-二氨基二苯硫醚、4-氨基偶氮苯、5-硝基-邻甲苯胺、邻氨基甲苯醚等9种禁用芳香胺浓度的方法。样品用三氯乙酸和乙腈混合提取后，经固相萃取小柱萃取净化后，选用C18色谱柱（50×4.6mm×1.8μm），用0.05%甲酸水溶液和0.05%甲酸乙腈溶液作为流动相梯度洗分离物后用液相色谱串联质谱仪（LC-MS-MS）测定。本方法中9种芳香胺分别在0.2-50mg/kg和0.5-50mg/kg范围内线性关系良好；平均回收率为78.3%-103.1%；相对标准偏差（RSD）为＜6%，检出限（LOD）为0.05-0.15mg/kg。 关键词 化妆品；液相色谱串联质谱法；芳香胺 中图分类号：O657.63 芳香胺是—类应用广泛的化工染料的合成原料，其分子结构中芳香烃的苯环与胺基的N相连接，分子比较活跃，进入人体后会破坏正常细胞中的脱氧核糖核酸（DNA），引起人体病变和诱发癌症。在目前世界化学工业迅猛发展的情况下，芳香胺已成为化学致癌原因中的主要因素。目前大约有20多种芳香胺，由这些芳香胺可合成几百种不同的芳香胺染料，也常称为偶氮染料，广泛用于化妆品、纺织品、玩具、工业染料等着色方面。部分芳香胺染料在与人体的长期接触中，可被皮肤吸收，并在人体内扩散。这些染料在人体的正常代谢所发生的生化反应条件下，可能发生还原反应而分解出致癌芳香胺，长期接触轻者会出现头疼、恶心、疲倦、失眠、呕吐、咳嗽等不良症状，重者则会导致膀胱癌、输尿管癌、肾癌等恶性疾病，且潜伏期长达20年之久[1,2]。可分解芳香胺染料除对人体有危害外，还会对污染水域等环境造成不可估量的损失。 化妆品中芳香胺的来源主要是采用了某些偶氮染料成分，后者在一定条件下分解为芳香胺；芳香类有机成分在生产加工过程中转变成芳香胺这类副产物也是一个主要来源。我国《化妆品卫生规范》（2007版）中已将联苯胺、2,4,5-三甲基苯胺、3,3-二氯联苯胺、3,3-二甲基联苯胺、4,4-二氨基二苯醚、4,4-二氨基二苯硫醚、4-氨基偶氮苯、5-硝基-O-甲苯胺、邻-茴香胺等列为禁用物质。关于环境、纺织品和塑料制品中禁用芳香胺的检测方法如超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）、高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱法（UPLC）、气相色谱串联质谱法（GC-MS）等，文献中已有较多报道[3-7]，但目前暂无化妆品中检测芳香胺的有效方法及标准。国外有文献报道[9-11]曾对染发剂和指甲油中的芳香胺采用GC-MS的方法进行检测，但该方法灵敏度不高，应用范围不广。鉴于芳香胺的危害性，本工作采用高效液相色谱-串联四级杆质谱联用技术对化妆品中的联苯胺、2,4,5-三甲基苯胺、3,3-二氯联苯胺等9种芳香胺进行了测定，建立了一个分离效果好、灵敏度和准确度高的分析方法。 1 试验部分 1.1 仪器与试剂 TSQ VANTAGE型液相色谱-串联质谱联用仪；AB204-S/A电子天平；Eppendorf 5804R型高速离心机；KH3200B型超声波清洗器。 乙腈、甲酸为色谱纯；甲醇、氨水、三氯乙酸为分析纯；标准样品：联苯胺、2,4,5-三甲基苯胺、3,3-二氯联苯胺、3,3-二甲基联苯胺、4,4-二氨基二苯醚、4,4-二氨基二苯硫醚、4-氨基偶氮苯、5-硝基-邻甲苯胺、邻氨基甲苯醚（纯度不低于99.0%，德国Dr.Ehrenstorfer公司）；0.45μm 和0.2μm微孔滤膜（德国Membrana公司）；固相萃取小柱（基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，德国Simon Aldrich Feather 系列PCX固相萃取柱，60 mg，3 mL）。 单个标准溶液储备液：分别称取联苯胺、2,4,5-三甲基苯胺、3,3-二氯联苯胺、3,3-二甲基联苯胺、4,4-二氨基二苯醚、4,4-二氨基二苯硫醚、4-氨基偶氮苯、5-硝基-邻甲苯胺、邻氨基甲苯醚标准品0.1g（精确到0.0001 g）至100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度线，配制成1000mg/L的单个标准储备液，保存在棕色瓶中，4℃保存。 混合标准溶液：移取适量体积的芳香胺标准样品储备液，用氨化甲醇溶液（氨水：甲醇=5：95）配制成0.05～3 mg/L的混合标准工作液，现配现用。 1.2 仪器工作条件 液相色谱条件：色谱柱：C18 4.6mm×50mm, 1.8μm； 流动相A 为0.05%（