【微生物检测方法】Chelex-100法和碱性裂解法提取细菌DNA.pdfVIP

中国卫生检验杂志 2008年 8 月 第 18卷 第 8期 　Ch inese Journal of H ealth L aboratory Technology, Aug 2008; Vol 18　No 8 1565 【微生物检测方法 】 Chelex - 100法和碱性裂解法提取细菌 DNA 的比较 钱雪琴 , 张军 , 沈芳 (上海市公共卫生中心 ,上海 　201508) [摘要 ] 　目的:通过对两种 DNA 提取方法的比较 ,寻找一种灵敏 、快速 、经济实用的提取方法 。方法 :采用 Chelex - 100 法和碱性裂解法分别提取不同浓度大肠杆菌 A TCC25922 和金黄色葡萄球菌 A TCC25923 的 DNA ,利用通用引物扩增 16SrDNA 片段检测两种方法的灵敏度 。结果 :碱性裂解法提取的不同浓度的两种细菌 DNA ,经 PCR 扩增均未显出目的 条带 ; Chelex - 100法提取不同浓度的两种细菌 DNA 均扩增出目的条带 , PCR 检测大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的灵敏 度均为 12 ×101 cfu /m l, 电泳结果提示相同浓度的大肠杆菌被提取到的 DNA 含量比金黄色葡萄球菌的含量高 。结论 : Chelex - 100法操作简便 ,可用于细菌 DNA 的快速提取 。 [关键词 ] 　Chelex - 100; PCR; 16SrDNA ;碱性裂解法 [中图分类号 ] 　R4465　　　　[文献标识码 ] 　A 　　　　[文章编号 ] 　1004 - 8685 (2008) 08 - 1565 - 02 Com par ison of m ethod s for ex traction of D NA by chelex - 100 an d a lka li sp lit Q ian X ueqin, Z hang J un, S hen F ang ( The L aboratory D iagno stic Center, Shanghai Pub lic H ealth Clin ical Center, Shanghai 20 1508, Ch ina) [ Ab stract] 　O bjective: To find a sen sitive, rap id and econom ic m ethod of DNA extraction by comp arison of Chelex - 100 w ith al kali sp litM ethods:DNA from different concentration s of E coli A TCC25922 and S tap hy lococcus au reus A TCC25923 was extracted u sing Chelex - 100 and A lkali sp lit m ethodsThe extracted DNA was amp lified u sing un iversal p rim ers for 16SrDNA fragm entResults:No signal was obtained u sing PCR on the DNA samp les extracted from different concentration s of two bacteria by alkali sp litA ll DNA samp les extracted from different concentration s of two bacteria by Chelex - 100 were amp lifiedThe sen sitivity