未修饰的纳米金结合等位特异性扩增来检测K-ras基因点突变.pdfVIP

2006 年第 64 卷 化 学 学 报 Vol. 64, 2006 第 12 期, 1279～1283 ACTA CHIMICA SINICA No. 12, 1279～1283 ·研究论文· 未修饰的纳米金结合等位特异性扩增来检测 K-ras 基因点突变 周 政 朱德斌 邢 达* (华南师范大学激光生命科学研究所 广州 510631) 摘要 将等位基因特异性扩增的特异性与纳米金特殊的光学性质相结合, 发展了一种新的基因点突变检测方法. 以肿 瘤中常见的 K-ras 癌基因第 12 位密码子作为点突变检测对象, 采用突变型引物对待测序列进行等位特异性扩增. 突变 型样品扩增产物中大部分是双链 DNA; 而野生型样品由于不能被顺利扩增, 产物中大部分是单链 DNA. 以纳米金颗粒 作为报告基团, 向两种不同基因型扩增产物中依次加入纳米金胶和盐溶液, 野生型基因扩增产物中的单链引物被吸附 到纳米金颗粒表面, 使得纳米金在适宜浓度的盐溶液中不发生聚集; 突变型样品扩增产物中的双链 DNA 由于与纳米金 颗粒间存在静电斥力而不能被吸附到纳米金颗粒表面, 纳米金在该浓度的盐溶液中发生聚集, 导致两种基因型的混合 液在吸收光谱和颜色方面均存在显著差异, 从而实现了检测基因点突变的目的. 该检测方法直观、快速、简便, 实验成 本低, 能够检测到 pmol 量级的样品, 为点突变检测提供了一种实用的新方法. 关键词 纳米金; 表面等离子峰; 等位特异性扩增; 点突变 Detection of K-ras Point Mutation by Unmodified Gold Nanoparticles and Allele-specific Amplification ZHOU, Zheng ZHU, De-Bin XING, Da* (Institute of Laser Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631) Abstract A novel method for point mutation detection was developed. This approach combined the optical properties of gold nanoparticles with the specificity of allele-specific amplification (ASA). K-ras oncogene was studied for its possible point mutation at codon 12. In ASA, only the mutant K-ras gene can be ampli- fied using the mutant-specific primers. Thus, the mutant amplification products were made of mostly dou- ble-stranded DNA, while the wild-type products were made of mostly unconsumed single-