高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质.pdfVIP

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2017-09-11 发布于重庆
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高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质.pdf

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第 8 卷第 6 期过程工程学报 Vol.8 No.6 2008 年 12 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2008 高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质姚忠，孙蓓蓓，李霜，何冰芳 (南京工业大学制药与生命科学学院，江苏南京 210009) 摘要：分离纯化了自行筛选的耐有机溶剂的地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformis YP1 所产的溶剂稳定性蛋白酶. 发酵液经硫酸铵沉淀、疏水层析及强阳离子交换层析纯化，得到电泳纯的蛋白酶；分子量约为 28 kDa ，纯化蛋白酶的比 5 U/mg ，纯化倍数为 37.2，酶活回收率为20.8%. 纯化的 YP1 蛋白酶对 50%(ϕ) 的多种亲水或疏水有酶活达到 1.18×10 机溶剂具有很高的耐受性，其中 50%(ϕ) 的DMF 和 DMSO 能显著促进 YP1 蛋白酶活力. YP1 蛋白酶为 Zn2+蛋白酶，最适反应温度为 55 ℃，最适反应pH 为 10.0，pH 8.0∼13.0 范围内具有高活力. 以酪蛋白为底物，YP1 蛋白酶的米氏常数 Km 为 0.048 g/L. 关键词：碱性蛋白酶；耐有机溶剂；地衣芽孢杆菌；纯化；表征中图分类号：Q556.3 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2008)06−1195−05 1 前言 YP1 为本实验室自行筛选并保存. 2.1.2 试剂蛋白酶是一类重要的工业用酶，广泛应用于洗涤分子量标准蛋白为 Sigma 公司产品，各种有机溶剂 [1,2] 剂、食品、制药、制革、诊断试剂及污水处理等领域 . 均为国产分析纯试剂. 自 1937 年首次报道采用蛋白酶催化肽合成以来，由于 2.2 方法其与化学催化肽合成相比具有避免使用昂贵的侧链保 2.2.1 粗酶液的制备护基团及危险性化学试剂等优点，已大量应用于小肽合参照文献[10]对 B . licheniformis YP1 进行产酶发成[3−5]. 在含高浓度亲水有机溶剂体系中，酶催化反应会酵，发酵液低温离心，上清为粗酶液. 快速向氨基酸脱水缩合形成肽键方向进行，而添加高浓 2.2.2 蛋白酶活力测定 [6] 度的亲水性溶剂往往导致酶的失活 . 参照文献[7]略作修改：以 10 g/L 酪蛋白(0.1 mol/L 溶剂稳定性蛋白酶是近年来发现的一类新型蛋白 Tris-HCl 缓冲液，pH 10.0)为底