D-dopa的手性转化中D氨基酸氧化酶的作用.pdfVIP

D-多巴手性转化及其机制的研究 硕士学位论文 第四章 D-dopa 的手性转化中D-氨基酸氧化酶的作用 前期实验中 我们运用EL-LC 证实 D-dopa 的确在肾匀浆中发生了手性转化 生成它的对映异构体 L-dopa 但体内 D-dopa 手性转化的分子机制尚不明确 现在 的观点认为 D-dopa 首先在 DAAO 的作用下氧化脱氨生成中间体 3 4- 二羟基苯 丙酮酸(3, 4-dihydroxyphenylpyruvate DHPPA) 随后在某转氨酶的作用下发生转氨 反应生成L-dopa[31, 59] 其中 D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase, DAAO, EC 1.4.3.3)是一种具有高 度立体选择性要求的核黄素蛋白质酶 通过氧化脱氨 把大多数的 D-氨基酸(除 D- 天冬氨酸和谷氨酸)氧化成过氧化氢和亚氨酸 后者立刻水解成 2- 酮酸和氨 反应 方程式如下 D-amino acid + O + H O -keto acid + NH + H O 2 2 3 2 2 DAAO 主要存在于植物和大量的真核生物中 包括酵母 真菌 两栖动物和哺 [60] 乳动物等 但至今尚不清楚它的生理功能 由于 DAAO 在组织中(尤其是肾脏和 肝脏)的表达水平很高 但 D-氨基酸在高等动物体中的浓度却很低 两者存在显著 [8, 61] 的负相关性 因此目前认为它在哺乳动物体内的主要作用是代谢内源的或食物 来源的D-氨基酸 防止D-氨基酸在体内聚集造成的毒性[26] 苯甲酸钠是DAAO 酶的选择性抑制剂 是DAAO 功能研究中常用的工具药[20, 32, 62] 学者们把苯甲酸钠以静脉注射或灌胃等方式作用于单侧帕金森大鼠和小鼠 发 现D-dopa 所致的旋转效应可以被抑制[32, 33] 从而推断 DAAO 在 D-dopa 的手性转 化过程中具有重要的作用 在其他氨基酸的代谢研究中 DAAO 的作用也得到了印证 例如 在考察DAAO 是否参与 D-NNA 手性转化的研究中 也发现苯甲酸钠(400 mg/kg)可完全消除 D- [20] NNA 对大鼠产生 的升压反应 但不影响L-NNA 对大鼠产生 的升压反应 - ddY/DAAO 小鼠是 DAAO 基因上发生了自体突变(Gly-181 Arg) 的小鼠 这 33 D-多巴手性转化及其机制的研究 硕士学位论文 种小鼠虽然表达 DAAO 蛋白 但是因为编码区内关键氨基酸的变更导致酶活性的 + - [63, 64] - 丧失 故而ddY 品系小鼠有ddY/ DAAO 和ddY/DAAO 小鼠之分 ddY/DAAO 小鼠也因为这一特性而成为 DAAO 和 D 氨基酸生理生化功能研究中的重要工具 + - Hasegawa 等人就发现D-Leu 在ddY/DAAO 小鼠体内发生手性转化而在ddY/DAAO [23] - 小鼠体内无转化现象 另