电镜观测生物样品微观形貌的解决方案.pdfVIP

Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn   扫描电镜观测生物样品微观形貌的解决方案   用于扫描电镜观察微观形貌的生物样品类别多种多样，如植物、昆虫、细胞组织、 病理组织和细菌病毒等。生物样品要获得清晰真实的扫描电镜图像，需要解决样品失水 变形和图像放电的问题。扫描电镜样品仓都是处于一定的真空状态下，未经处理的含水 生物样品容易因水分挥发出现表面结构变形，如图1所示的幼芽叶气孔。另外生物样品 通常导电性不良，不恰当的电镜参数选择会引起图像放电现象发生。本文以日立 S-3400N型钨灯丝扫描电镜为例，针对不同生物样品的特点，给出四种形貌观察的解 决方案。        图1幼芽叶未经喷金和干燥处理在电镜样品仓出现失水变形 首先，对于含水量较少、放大倍率不太高的生物样品，如大麦的叶片和根，可以不 喷金直接放入扫描电镜样品仓，高真空下用低加速电压观察。在高真空下，样品仓压力 -3 大概10 Pa，短时间（如10分钟）内看不到明显的表面失水变化，可以获得非常好的 形象细节。日立S-3400N具有电子枪四偏压设计，能够有效提高低加速电压下的发射 束流，改善图像信噪比，并能通过设定小的探针电流值间接提高实际样品的分辨率。图 2和图3是白粉病菌入侵大麦叶片的实验图像，实验中采取1.5kV的低加速电压观察到 叶片上微小细节形貌，放大倍率在2000倍依然具有非常好的图像清晰度和信噪比。 Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn          图2正常的大麦叶片气孔微观形貌，样品未喷金，高真空直接观察         图3大麦叶片的白粉病菌微观形貌，样品未喷金，高真空直接观察 第二，对于医学类病理样品观察扫描电镜，通常采取冷冻干燥或临界点干燥的方式， 适当喷金后可以获得信噪比好，结构清晰的高倍率图像。图4是冷冻干燥后的血液，可 以观察到正常或病变的红细胞及白细胞。使用冷冻干燥仪或临界点干燥仪处理生物样品 可以避免样品脱水过程中的组织变形，样品便于保存。     Marketing  天美（中国）科学仪器有限公司 TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn           图4病变组织中的红白细胞(喷镀Au) 第三，如果要保持水分观察含水量大的生物样品，推荐使用冷冻传输附件。在冷冻 的状态下制备和观察样品，有利于保持样品的原始形貌。图5中的水稻根毛样品在自然 失水情况下变形歪倒（左图）