半滑舌鳎肝脏细胞系的建立与鉴定.pdfVIP

任国诚等：半滑舌鳎肝脏细胞系的建立与鉴定 半滑舌鳎肝脏细胞系的建立与鉴定! 任国诚! !!! 陈松林 !! 沙珍霞!! ! （中国海洋大学海洋生命学院 青岛 ） !! （ 农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室，中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 ） 摘 要 以半滑舌鳎肝脏组织为材料，探索了组织细胞分离培养条件，建立了半滑舌鳎组 织细胞培养技术及半滑舌鳎肝脏细胞系（ ）。该细胞系的培养基是添加了抗生素、胎 牛血清（ ）、花鲈血清（ ）、成纤维生长因子（ ）的 。 形态呈纤维状，在 培养基中生长迅速，经 多天的培养，成功传代 多代。检测了温度、 浓度、 对其生长的影响，结果表明，在 生长良好，但当温度低于 时细胞生长速度明 显减慢；在一定浓度范围内，其生长速度随血清浓度的升高而增快，血清浓度过高或过低 对其生长不利；在培养基中添加 可以使细胞生长速度显著提高；其二倍体核型为 。将绿色荧光蛋白（ ）报告基因通过脂质体介导的方法转入 中并成功地获 得了表达，转化率为 左右。该细胞系的建立为研究鱼类病毒学、免疫学、遗传学、功 能基因组学提供了很好的实验材料。 关键词 半滑舌鳎，肝脏细胞系，核型， 报告基因 对半滑舌鳎的研究主要限于养殖条件探索、人工育 引 言 苗，在筛选、分析功能基因方面的研究很少，为此，本 研究建立了半滑舌鳎肝脏细胞系 ，现未见国内 鱼类的细胞培养起始于 世纪 年代初，迄 外有建立半滑舌鳎细胞系的报道。 今为止，已经建立的鱼类细胞系多为淡水鱼类和溯 ［ ］ 河性鱼类，主要用于病毒学研究、免疫学研究 ，海 材料和方法 ［ ］ 水鱼类中建立的细胞系比较少 。半滑舌鳎隶属 于鲽形目舌鳎科，是我国新开发的重要海水养殖鱼 ! ! 原代培养和继代培养 类，在我国沿海均有分布，其分布数量以渤海最多。 本实验所用的半滑舌鳎取自烟台海阳渔场。自 半滑舌鳎是一种近海温水性大型底层鱼类，具有活 半滑舌鳎体内取出肝脏， 酒精消毒 ，磷 动范围小、营养等级低、食性温和、个体大、生长快和 酸缓冲液（ ）清洗 次，然后将组织块在 倍胰