牛源性停乳链球菌最佳培养基的筛选及影响因素研究.pdfVIP

力强 调 2．2亿头奶牛，其中约有 1／3的奶牛患有各种类型乳房炎 ， 1．2 培养基 查 每年因乳房炎造成的损失高达 350亿美元 ，仅美国的损失 普通牛肉汤、改 良肉汤 、优化培养基 、THB培养基和 研 就达20亿美元I。据文献报道 ，奶牛乳房炎造成的损失大 70mL／L羊血琼脂斜面等，均 由中国农业科学院兰州畜牧 究 约70％是由隐性乳房炎导致的奶产量下降而引起的f21。引 与兽药研究所奶牛乳房炎课题组提供。 起奶牛乳房炎的病原微生物多达 150多种 ，但临床上最常 1．3 仪器 见的约有 20多种，其中主要 以链球菌和葡萄球菌为主，约 超净工作台 ：SW—CJ一2FD双人单面超净工作台，苏州 占整个奶牛乳房炎病例的 74％左右 3【]。为此 ，笔者以临床 净化设备有限公司生产。恒温摇床 ：HZP一250型全温恒温 分离的无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌三种菌 摇床 ，上海精宏 验 没备有限公 司。 的优势血清型菌株为制苗菌株，研制出了奶牛乳房炎灭活 1．4 方 法 多联苗 ，并在全国各地多个奶牛场使用 ，表现出 良好的免 1．4．1 菌种的活化 取冻干保存的停乳链球菌 (21009)， 疫效果 。但 由于葡萄球菌和链球菌免疫原性较弱l5]，造成 开启后接种含 2％血清的普通牛 肉汤，37℃培养 16—18h 疫苗免疫后抗体水平较低 ，免疫持续期较短。因此 ，如何提 后，涂片、镜检 、纯粹后 ，接种 70muL羊血琼脂斜面 ，37℃ 高制苗菌株的抗原性 ，是研制高效乳房炎疫苗的关键所 培养 l6—18h，将菌苔刮入菌种保存液 中，混合均匀 ，分装 在。JOSEA(1997)等6【1曾报道 ，用金黄色葡萄球菌和链球 冻存管 1mL／支 ，作为母种 ，加盖 ，贴签 ，注明菌种名称 ， 菌浓缩抗原制备的氢氧化铝多联苗 ．免疫泌乳牛后可明显 置一70℃冰箱保藏。 降低乳房炎的感染率。笔者等的试验亦证 明了这一点I。 1．4．2 细菌种子液的培养 将一7O℃冰箱保藏 的停乳链 为了提高乳房炎多联苗中单位体积的抗原含量，特对停乳 球菌 (T2009)母种取出，接种含2％血清的营养 肉汤 ，37℃ 链球菌进行 了最佳培养基的筛选及生长过程 中影响因素 培养 l6—18h，镜检纯粹后 ，接种 70mL／L羊血琼脂斜面传 试验，现报道如下。 代增菌 ，37 培养 l6—18h，即为种子液。 1 材料与方法 L4．3 培养 基 的筛 选 将 停 乳链 球 菌种 子 菌悬 液 以 1．1 菌种 0．08亿个／mL接种量分别接种装量为 300mL的改 良肉 停乳链球菌12009，系从兰州 、天津 、西安等地奶牛场 汤、优化培养基和 THB的500mL三角瓶 中，在37℃下静 止培养4h．后在 120r／min摇床上振荡培养 24h，其间每 隔2h取样一次，用平板计数法测定菌浓度。 1．4．4 影响因素试验 1．4．4．1 溶氧量对停乳链球菌生长的影响 将停乳链球 菌种子菌悬液 以0．08亿个 ／mL接种量 分别接种装量 为 300、200、100和