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* * 高中生物细胞学实验技术 [实验]检测生物组织中的糖类、脂肪 和蛋白质 还原糖的鉴定 脂肪的鉴定 蛋白质的鉴定 1. 还原糖的鉴定 1.1 实验原理 用婓林试剂只能检验生物组织中可溶性的还原糖存在与否，而不能鉴定可溶性的非还原性糖。婓林试剂由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成，两者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。 婓林试剂很不稳定，故应将组成婓林试剂的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuSO4溶液)分别配制、储存，使用时临时配制，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。用婓林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色－棕色－砖红色（沉淀）。 Cu(OH)2对热不稳定，易脱水生成黑色Cu2O的，使实验结果出现红褐色、褐色、黑色等干扰。 1. 还原糖的鉴定 1.2 实验材料 植物组织是常用的实验材料，但必须加以选择。最好不用双子叶植物的叶子作实验材料，也不宜用单子叶植物的叶子作实验材料。本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织（或器官），而且组织的颜色较浅，或近于白色，如苹果和梨的果实。通过比较发现，梨是比苹果更好的实验材料。梨汁液多，挤汁操作很容易。还可用白色甘蓝叶和白萝卜。 1.3 方法 1.3.1 徒手切片鉴定 1.3.2 酒精灯直接加热 1.3.3 苹果块法 2.脂肪的鉴定 2.1实验原理 苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ为一种橙黄色脂肪染色剂，这两种染液都可溶于脂肪而使脂肪染上色。苏丹Ⅲ是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15％），是脂肪染色剂，与脂肪反应呈橘黄色。苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。因苏丹Ⅳ染液与脂肪的亲和力比较强，所以染色时间一般为1min左右。在对脂肪进行鉴定时，切出符合要求的薄切片是实验能否成功的关键。 2.脂肪的鉴定 2.2 实验材料 选择富含脂肪的种子如花生种子（取其 子叶）。 2.3 方法改进 2.3.1 挤压法 2.3.2 纸染法:取花生种子，剥去种皮，放在一张白纸上。然后用解剖刀压榨，拨去压碎的子叶，拿起纸，对着光线仔细观察，如纸上有透亮的发光点，然后用苏丹Ⅲ染液滴于透明发亮处和纸上另一不透明处观察，并比较两处颜色。透明发亮处被染成橘黄色，证明是脂肪物质。 2.3.3 干种子徒手切片法 2.3.4 散落组织细胞染色法 3.蛋白质的鉴定 3.1 实验原理 双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性环境中能和硫酸铜结合成红紫色的络合物。蛋白质分子中含有的肽键与双缩脲结构中的化学键相似，因此，蛋白质与双缩脲试剂也能发生颜色反应。 双缩脲反应是指具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应，生成红紫色的络合物。所有的蛋白质均有此显色反应。双缩脲试剂由NaOH和CuSO4两种溶液组成。在实验过程中，先在含蛋白质的溶液中加入等体积的 NaOH溶液，混合均匀后，再滴几滴CuSO4溶液（量较少）。即先后加入NaOH 和CuSO4溶液。 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.01g/mL的CuSO4溶液。在碱性溶液中，蛋白质分子发生颜色反应。 3.蛋白质的鉴定 3.2 实验材料 最好选用富含蛋白质的生物组织（或器官）植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋（卵白）。如用大豆，必须提前浸泡1～2h,这样容易研磨成浆，若用豆浆可以节约实验时间。如果用稀释的卵白做实验材料，效果会更好。 在对蛋白质进行鉴定时，若使用蛋清，必须按要求稀释。实验样液要留出一份作为对照，以便最后进行比较。鉴定蛋白质时NaOH溶液加入后创造的碱性溶液环境下，和肽键形成红紫色的络合物。所以必须先加入NaOH，再滴少量的CuSO4。只能加入3～4滴CuSO4，而不能加过量。 3.3 方法 也可用组织切片法 : [实验] 观察DNA和RNA在细胞中的分布 1.实验原理 DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。核酸均为酸性，对碱性染料甲基绿和吡罗红具有亲和力，这两种染料对DNA和RNA的亲和力不同。用这两种染料混合液处理细胞时，由于DNA和RNA聚合程度不同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成绿色，而吡罗红分子中仅一个正电荷，可与聚合程