外源基因表达载体的构建以及向斑马鱼（Dania rerio）和鲈鱼（Lateolabrax japonicus）胚胎的转移.pdfVIP

外源基因表达载体的构建以及向斑马鱼((Daniarerio)和v鱼 (Lateolabraxjaponicus)胚胎的转移 摘 要 本研究构建了pCMVnramp表达载体，并且利用显微注射法将不同的外源基 因导入花妒和斑马鱼受精卵内，研究了外源基因在体内的整合和表达。 利用pCMVGFP和获得的真绸 (Pagrusmajor)的天然抗性相关巨噬蛋白 (Nramp)的cDNA构建了pcMVnramp质粒表达载体，启动子为巨细胞病毒 (CMV)启动子。通过显微注射的方法，将外源基因注射入花妒和斑马鱼单细 胞期受精卵动物极细胞质内，使用的外源基因包括绿色荧光蛋白 (GFP)基因、 Nramp基因和抗菌肤Magainin基因。每卵注射50pL外源DNA溶液(浓度为50ng/ pL)是显微注射比较适宜的注射剂量。实验统计了花妒胚胎的存活状况，注射 胚胎的存活率低于对照组。实验从四种不同的启动子调控的GFP基因中筛选出 了pCMVGFP，它能够在妒鱼和斑马鱼胚胎内强烈表达。在花妒注射实验中，注 射后48小时绿色荧光蛋白就已经在胚胎内丰富表达，然而多数表达胚胎表现为 镶嵌性。在斑马鱼胚胎中，注射 12小时后，有微弱绿色荧光产生，至48小时