酶工程第四章.pptVIP

第四节 工业生产中酶纯化过程的生物安全措施 大多数的座箱故障都出自手套的故障上。只能借助于戴上较厚的手套和放弃轻松的操作条件来减少接触污染物。但如果主要的危险来自空气流，迅速更换手套是足以能够应付的。简化的设计已在发展，特别是应用于外科手术有关的活动膜套。 2.环境的监控 空气传播的微生物一般用槽式取样器测定，取样器中转动的陪替氏培养皿上有适当的营养凝胶，在规定的时间内接受一定容积的空气。然后将培养皿放在特定的生物生长条件下培养。这种试验应该在工厂停车期间和生产期间进行，以便确定基本含量和特定的泄漏情况。据有关方面报导，该实验应以空气取样法为基础，蛋白质水解酶粉尘反应的安全标准已确定。这一做法逐渐推广到气溶胶形式的其它酶类。 第四节 工业生产中酶纯化过程的生物安全措施 3. 人员的教育和医学上的检验 在安全操作中仅次于防止污染物扩散的最重要因素是对工作人员进行关于处理物料和设备的示范教育。首先必须强调安全使用的一般规则。例如，酶分离车间用的机器需要有大负荷的电动机并要供应大量水源以便用水冲洗。因此应注意安全接线和绝缘的重要性，此外，所处理的物质有高度活性，要求讲究个人卫生。清洁的保护工作服应在厂内穿着而不要在厂外穿着。离厂时务必洗手。禁止在车间内吃东西和吸烟。 凡招收来处理大量生物物质的工作人员均应经过医学检查和定期的体检。一切不因厂外原因造成的症状均应报告。医学检查应包括血液和肺功能的试验及胸部X光透视，可能的话还应进行皮肤的过敏反应试验。这些人员或他们的亲属，要是有花粉热或其它过敏症尤其是有关皮肤过敏方面的病史的人员一般不宜从事该工作，因而应排除这类人员参加操作，这样做的理由虽不够充分，但是应该事先对他们说清楚。 第四节 工业生产中酶纯化过程的生物安全措施 4. 废物处理 保证工厂工作人员安全的职责与需要保护其他人员不受其家废物的影响同样重要。排出气体应经过滤和测定控制。应有更换和处理过滤器的安全规程。固体废料经高压蒸煮后一般可作废物抛弃。部分放出的液体废料可在工厂附近处理。有关部门的规定主要是控制有关如容许的生物需氧量和消除例如腐蚀性盐类的项目。微生物细胞的存在并不表示有危险性，因为正常的污水中微生物的含量就很高。但是特定的种类或菌株对城市污水处理可能是有害的或者会引起麻烦，细胞内的物质和内毒素的影响还没有完全确定。 第四节 工业生产中酶纯化过程的生物安全措施 5.产品的安全性 有关产品安全性的控制各个国家并不相同。这在很大程度上有赖于长时间的经验。美国在GRAS(一般认为是可靠的)所列的法则名称下的产品目录一般地说在生产和使用历史上是安全的，但也有可能在某些时候发现有不安全的情况。产品安全法规实施的结果，在食品方面的产品只有部分的微生物酶得到承认。其余的需要经长期现场试验并得到承认之后方可补充到产品目录中去。这就是指从新的来源发展产品，要先用大量的投资仍然是没有把握被批准使用。Reed(1975)对食品酶的某些必要条件作过概括性的论述。 安全保证应该是工厂传理部门高级成员和厂外独立安全机构职员共同的职责。 第三节 酶的提纯 在吸附过程中，被分离物共价结合到层析介质上，如巯基通过自由巯基与二硫链互换反应选择性地吸附在活化的巯基化的介质上，形成一混合二元化合物。由于偶联反应是可逆的，因此在洗涤除去那些没有吸附的物质后，就可用能够还原二硫键的低分子量巯基化合物进行洗脱，如L-半胱氨酸、巯基乙醇、谷胱甘肽和二硫苏糖醇。 当酶蛋白巯基由于空间掩蔽效应(steric shielding)不能参与反应时，层析操作可在含有变性剂(8mo1／L尿素或6mol/L氯化胍)的缓冲液中进行。如果蛋白质所含巯基是以二硫键形式存在(如牛胰核糖核酸酶)，那么就必须先用还原剂打开二硫键，再进行分离。 第三节 酶的提纯 现在主要使用两种共价层析介质，即琼脂糖谷胱甘肽2-吡啶二硫化合物和2-吡啶二硫化合物-羟基丙基醚琼脂糖。前者以谷胱甘肽作手臂，SepHarose 4B为载体；后者以羟基丙基作亲和手臂，SepHarose 6B为载体。两者在洗脱后，都可用1.5mmol／L、pH8的2，2-二吡啶二硫化合物溶液再生。 共价层析方法除用来分离巯基酶以外，还可用来分离含巯基的多肽片段，以及汞化的（mercurated）mRNA。 第三节 酶的提纯 六、其他分离方法 除了前面介绍的主要方法外，还有许多其他的分离方法可用于酶的提纯，如无机吸附层析，巯水吸附层析、浓缩、干燥、薄板层析、高效液相色