生化工艺第六章发酵生产染菌及防治.pptVIP

第二节 发酵异常现象及原因分析 表6-3 上海天厨味精厂谷氨酸发酵染菌原因分析 染菌原因 染菌百分率/% 染菌原因 染菌百分率/% 空气系统染菌 32.05 补料、取样带菌 4.30 设备问题 15.46 种子带菌 1.72 管理和操作不当 11.34 环境污染及原因不明 35.13 第二节 发酵异常现象及原因分析 1．染菌的杂菌种类分析 对于每一个发酵过程而言，污染的杂菌种类的影响是不同的。如在抗生素的发酵过程中，青霉素的发酵污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害更大；链霉素的发酵污染细短杆菌、假单胞杆菌和产气杆菌比污染粗大杆菌更有危害；四环素的发酵过程最怕污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌；柠檬酸的发酵最怕青霉菌的污染；谷氨酸发酵最怕噬菌体污染。因噬菌体蔓延迅速，难以防治，容易造成连续污染。若污染的杂菌是耐热的芽孢杆菌，可能是由于培养基或设备灭菌不彻底、设备存在死角等引起；若污染的是球菌、无芽孢杆菌等不耐热杂菌，可能是由于种子带菌、空气过滤效率低、除菌不彻底、设备渗漏和操作问题等引起；若污染的是真菌，就可能是由于设备或冷却盘管的渗漏、无菌室灭菌不彻底或无菌操作不当、糖液灭菌不彻底（特别是糖液放置时间较长）而引起。 第二节 发酵异常现象及原因分析 2．发酵染菌的规模分析 从染菌的规模来看，主要有三种。 （1）大批量发酵罐染菌 如发生在发酵前期，可是种子带菌或连消设备引起染菌；如果染菌发生在发酵中期、后期，且这些杂菌类型相同，则一般是空气净化系统存在诸如空气系统结构不合理、空气过滤器介质失效等问题；如果空气带菌量不多，无菌试验的显现时间较长，这就使分析防治空气带菌增加了难度。 第二节 发酵异常现象及原因分析 （2）部分发酵罐染菌 如果染菌发生在发酵前期，就可能是种子染菌、连消系统灭菌不彻底；如果是发酵后期染菌，则可能是中间补料染菌，如补料液带菌、补料管渗漏。 （3）个别发酵罐连续染菌 此时如果采用间歇灭菌工艺，一般不会发生连续染菌。个别发酵罐连续染菌，大都是由于设备渗漏造成，应仔细检查阀门、罐体，或罐器是否清洁等。一般设备渗漏引起的染菌，会出现每批染菌时间向前推移的现象。 第二节 发酵异常现象及原因分析 3．不同污染时间分析 从发生染菌的时间来分析，也是三种情况。 （1）染菌发生在种子培养阶段 或称种子培养基染菌。此时通常是由种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底，以及接种操作不当或设备因素等原因而引起染菌。 （2）在发酵过程的初始阶段发生染菌 或称发酵前期染菌。此时大部分染菌也是由种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底，以及接种操作不当或设备因素、无菌空气带菌等原因而引起。 （3）发酵后期染菌 大部分是由空气过滤不彻底、中间补料染菌、设备渗漏、泡沫顶盖以及操作问题而引起染菌。 第三节 杂菌污染的途径和防治 从技术上分析，染菌的途径不外有以下几方面：种子包括进罐前菌种室阶段出问题；培养基的配制和灭菌不彻底；设备上特别是空气除菌不彻底和过程控制操作上的疏漏。遇到染菌首先要监测杂菌的来源。对顽固的染菌，应对种子、消后培养基和补料液、发酵液及无菌空气取样作无菌试验以及设备试压检漏，只有系统、严格监测和分析才能判断其染菌原因，做到有的放矢。 第三节 杂菌污染的途径和防治 种子带菌的检查可从菌种室保藏的菌种、斜面、摇瓶直到种子罐。保藏菌种定期作复壮、单孢子分离和纯种培养；斜面、摇瓶和种子罐种子作无菌试验，可以用肉汤和斜面或平板培养基检查有无杂菌。显微镜检观察菌形是否正常，应注意在显微镜检不出杂菌时不等于真的无杂菌，需作无菌试验才能最后肯定。 培养基和设备没消透的原因有多方面，如蒸汽压力或灭菌时间不够，培养基配料未混合均匀，存在结块现象，设备未清洗干净，特别是罐冲洗不到的犄角处，有结痂而未铲除干净。 第三节 杂菌污染的途径和防治 设备方面特别是老设备也常会遇到各种问题，如夹层或盘管、搅拌轴密封封和管道的渗漏，空气除菌的效果差，管道安装不合理，存在死角等是造成染菌的重要原因。 过程控制主要包括接种、过程加糖补料和取样操作等是否严密规范。一级种子罐的接种可分为血清瓶针头或管道方式或火焰敞口式接种，罐与罐之间的移种前管道冲洗或灭菌不当也会出问题。 第三节 杂菌污染的途径和防治 一、种子带菌及其防治 由于种子带菌而发生的染菌率虽然不高，但它是发酵前期染菌的重要原因之一，是发酵生产成败的关键，因而对种子染菌的检查和染菌的防治是极为重要的。种子带菌的原因主要有保藏的斜面试管菌种染菌、培养基和器具灭菌不彻底、种子转移和接种过程染菌以及种子培养所涉及的设备和装置染菌等