散斑照明宽场荧光层析显微成像技术研究3.pdfVIP

第 57 卷 第 12 期 2008 年 12 月 物 　理 　学 　报 Vol . 57 ,No . 12 ,December ,2008 10003290200857 ( 12) 764109 ACTA PHYSICA SINICA 2008 Chin . Phys. Soc . 散斑照明宽场荧光层析显微成像技术研究 ) ) ) ) ) ) ) 林浩铭1 2 　邵永红1 　屈军乐1 　尹 　君1 　陈思平2 　牛憨笨1 1) (深圳大学光电子学研究所 ,光电子器件与系统教育部重点实验室 ,深圳 　518060) 2) (深圳大学生物医学工程重点实验室 ,深圳 　518060) (2008 年 3 月 23 日收到 ;2008 年 8 月 29 日收到修改稿) 　　介绍了一种新的宽场荧光层析显微方法. 在传统宽场显微镜中引入散斑图案照明样品 ,控制散斑图案的动态 变化 ,利用 CCD 相机记录对应的一系列荧光图像. 由于焦平面内强度变化远比焦平面外强度变化剧烈 ,通过合适的 算法能够获得焦平面的层析分辨的荧光显微图像. 标定了系统参数 ,并研究了不同的图像重建算法对系统性能的 影响 ,获得了不同生物组织样品的层析图像. 实验表明 ,该显微方法能用于组织光学切片成像 ,在临床医学中具有 实际应用价值. 关键词 : 荧光 , 散斑照明 , 荧光显微 , 层析 PACC : 4225H , 4230 1 引 言 2 理论基础 激光扫描共焦显微镜[ 1 ,2 ] 是一种性能 良好的光 当激光束照射到物体上时 ,会在 自由空间产生 学显微成像工具 ,在生命科学研究中获得了广泛的 散射光. 物体表面的每一个物点都可视为一个子波 应用. 与普通的宽场荧光显微方法相比,共焦荧光显 源 , 由于激光束存在高相干性 ,因而由每一个物点散 微的优点在于能获得一定厚度样品的三维层析图 射的光将和其他物点散射的光发生干涉. 因为物体 ( [3 ] 表面上各个面元是随机分布的 这种随机性由表面 像 ,可提供较高的时间和空间分辨率 . 但是这种显 ) 粗糙度引起 , 由它们散射的各个子波的振幅和相位 微方法需要对一个或多个照明点进行扫描 , 需要三 都不相同 ,并且是无规则分布 ,所以由各面元散射的 维扫描系统 ,从而使系统更加复杂且成像速度较慢. 子波相干叠加形成的反射光场具有随机的空间光强 为了提高成像速度 , 人们还提 出了非扫描 的显微 分布. 当把探测器置于光场中 ,在探测器接收面上能 成像技术 , 比如结构光照明显微成像技术[4 ] . 因为 [9 ] 够记录到一种随机的干涉图案 ,此即“散斑图案” . 样品对结构光的散射会 降低 图像 的对 比度 , 所 以