体液性排斥反应诊断及发生机制研究.pdf

分类号—— 密级—— UDC 编号—— 解放军总医院、军医进修学院 博士后研究工作报告 学 研究工作起止时间： 2QQ鱼年j卫月一2QQ窆年尘月 研究报告提交时间： 2QQ窆 年上月 解放军总医院、军医进修学院制 中文摘要 体液性排斥反应诊断及发生机制的研究 博士后：许晓光 导 师：石炳毅教授 中文摘要 机体对同种异体抗原所产生的排斥反应既包括细胞免疫因素也包括体液免疫因 素，然而在过去的五十多年里，人们过分强调了细胞免疫因素在排斥反应中的作用， 而忽略了体液免疫的重要作用。抗体介导的体液排斥学说是近十几年来才逐渐得到 重视并发展起来的。 本研究首先对选择性表达于混合淋巴细胞培养中的活化T细胞和NK细胞表面 的p140分子在急性排斥反应患者PBMC的表达进行了分析，并应用免疫沉淀法、 A2 亲和层析和质谱分析法对P140进行了初步鉴定。质谱分析结果显示，由mAb 纯化的蛋白为细胞骨架蛋白13．actin分子。推测在细胞膜蛋白提取和免疫沉淀的条 件下，单克隆抗体A2不能结合目的蛋白P140，从而导致质谱分析结果为非特异性 的高峰度细胞骨架蛋白。这提示通过应用单克隆抗体进行免疫沉淀并进行亲和层析 隆抗体的抗原识别表位有望分析p140的氨基酸序列。 其次，应用免疫组织化学染色的方法对因排斥反应而丧失功能的移植肾组织中 通过局部分泌抗体的方式参与移植肾的体液排斥反应机制。由主要负责辅助B细胞 的新的T细胞亚群——滤泡辅助性T细胞(Tfollicular helper 与体液排斥反应的发生也密切相关，并与移植肾组织中B细胞和浆细胞聚集性浸润 存在相关性，Tfh也在体液性排斥反应的发生中发挥重要作用，并直接参与移植肾 局部的体液免疫应答。由此可见，对浆细胞和Tfh细胞的检测可能有助于体液性排 博十后：许晓光 导师：石炳毅教授 中国人【心解放军军医进修学院博十后研究报告 中文摘要 斥反应的诊断，有望成为体液性排斥反应的辅助诊断指标。 色，结果显示，约30％发生慢性排斥反应的移植肾组织中存在淋巴组织再生，提示 在这些淋巴组织内成熟的的淋巴细胞，尤其是B细胞及其继续分化的浆细胞可能在 慢性排斥反应的发生、发展中起关键作用。同时，对发生慢性排斥反应的移植肾组 达促进淋巴组织再生，从而参与慢性排斥反应的发生和发展。 最后，应用免疫荧光染色和流式细胞术对一个新的肿瘤坏死因子子家族APRIL 行了研究。结果显示，除BAFFR外，其余四种分子在慢性排斥反应病人的T细胞 子家族在慢性排斥反应中的免疫效应细胞活化中发挥重要作用，进而参与慢性排斥 反应的发生和进展。这5个分子有望成为慢性排斥反应临床诊断的新指标和治疗的 新靶点，而其单克隆抗体则在慢性排斥反应或体液性排斥反应的治疗中有着广阔的 应用前景。 综上所述，本研究对p140分子进行了初步鉴定，并通过免疫组织化学染色的方 法筛选到了两个新的可用于体液性排斥反应诊断的候选分子和治疗靶点一CDl38 导一些趋化因子的表达促进淋巴组织再生，从而参与慢性排斥反应的发生和发展； 则可能通过促进免疫细胞的活化参与慢性排斥反应的发生和进展。这为进一步筛选 体液性排斥反应及慢性排斥反应的诊断和治疗靶标，阐明体液性排斥反应和慢性排 斥反应发生的分子机制打下了基础。 关键词：体液性排斥反应；慢性排斥反应；发生机制；研究 博士后：许晓光 导师：