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抗体的制备及应用 一、抗体的一些基本概念 单克隆抗体 (Monoclonal Antibody,McAb) 单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体 多克隆抗体 (Polyclonal Antibody) 多个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体 抗原（antigen ，Ag） 表位，抗原结合位点，抗原决定簇（epitope） 1、单克隆抗体的特点 特异性强，具有抗原结合位点的专一性。（不是抗原的专一性！） 因结合位点的单一性，有时不易捕捉抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产生凝集反应或沉淀反应。 脑垂体分泌的一些激素： hFSH 促卵泡激素 hLH 促黄体生成素 hTSH 促甲状腺激素 hCG #绒毛膜促性腺激素 单克隆抗体有交叉反应是由于不同的抗原上有完全相同的表位（100%的交叉反应）,或有相似的表位（不同程度的交叉反应）。 产生凝集反应的原理 购买抗体时要注意厂商的标注 适合于做什么实验,使用浓度多少 WB（Western blotting ，免疫印迹) IH (Immunohistochemistry, 免疫组织化学) IC (Immunocytochemistry, 免疫细胞化学) IEM (Immune lectron microscopy,免疫电镜) FCM (Flow Cytometry,流式细胞仪) ELISA(enzyme linked immunosorbent assey, 酶联免疫吸附实验,酶联免疫分析) 2、多克隆抗体的特点 多抗是单抗的混合物，因此多抗的性质是一个群体综合的性质。 特异性一般比单抗差 因为由不同性质的抗体组成，只要其中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉反应，所以多抗更容易有交叉反应。 比单抗更容易捕捉抗原。 因为含有抗不同表位的抗体，多种抗 体都可与抗原结合。 二、抗体的制备 1、单克隆抗体的制备 无法采用生物化学的方法从多抗中分离 必须采用细胞杂交的方法来制备 能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问 题也有机遇问题 制备单克隆抗体的基本原理： 致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （myeloma） （能够分泌特异性的抗体 ， （不能分泌特异性的抗体， 不能在体外长期生存 ） 但能在体外长期生存） 阳性杂交瘤细胞 (hybridoma) （既能分泌特异性抗体， 又能够在体外长期生存） 克隆化培养 （产生单克隆的阳性杂交瘤细胞） 生产单克隆抗体 2、多抗的制备 常用的免疫动物 免疫的基本步骤 如何免疫兔子 1）常用的免疫动物 兔子（rabbit）：最常用于自制抗体， 抗体量较多。（新西兰,大耳白） 小鼠（mouse）：可用于自制抗体，但 抗体量很少。（BALB/C,昆明鼠） 大鼠（rat）：可用于自制抗体，免疫过 程要麻醉动物。（Wistar大鼠） 羊（sheep、goat）：常用于较大批量地 生产抗体（商品）。 马（horse）：常用于大批量生产治疗用 抗体（商品）。 豚鼠（guinea pig）：国外实验室常用。 2）免疫的基本步骤 基础免疫：首次，抗原用量大，用佛式完全 佐剂（Complate Freund’ adjuvand , 含矿物油,卡介苗等). 加强免疫：第2次以后，抗原量减半，多次， 间隔2-4周，用佛式不完全佐剂 (Incomplate Freund’ adjuvand ,