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课题1 学习植物组织培养技术 一、课题分析 1．教学目标 （1）简述植物组织培养技术的基本原理、方法、步骤。 （2）能进行植物组织培养的基本操作。 2．知识背景 早在20世纪初，许多科学家将植物细胞和组织作离体培养，为植物组织培养技术的发展奠定了基础。美国科学家斯蒂瓦特从40年代开始，用悬浮法培养野生胡萝卜的韧皮细胞，通过十多年的艰苦探索，终于培育出根、芽齐全的小植株，首次证实了植物细胞的全能性。1964年，印度的古哈和马赫施瓦里在离体培养毛曼陀罗花时，首次培育出单倍体的花粉植株。目前，我国的组织培养技术，特别在单倍体育种方面，培育出许多优质高产小麦、水稻新品种，在国际上处于领先地位。 运用植物组织培养可以使一个茎尖、一块叶片，一年之内变成数万乃至数十万的小植株。植物组织培养何以具有如此之大的繁殖本领？这是因为包含全部遗传信息的植物体上的每一个细胞都是“全能选手”，可以包揽从细胞增殖、分化到长成完整植物体的“全活”。在植物身上，这些细胞的才能被埋没，只能默默地承担某一项具体工作，如构成茎组织、叶片组织等。如果把它们请出体外，并给予适当的条件刺激，这些细胞便可以大展鸿图，发挥出神速的增殖分化潜能，变成一个个根、茎、叶齐全的小植株，就象孙悟空拨出的一根汗毛一样。组织培养物小到分离出的单个细胞，大到切割下来的一小段茎，都可在培养基中分化增殖，变成许多完整新植株。 目前，组织培养在生产实践上已有广泛应用，主要用于： 快速繁殖 植物组织培养的突出优点是“快”，通过这一方法能在较短时间内迅速扩大植株的数量。如兰花、杨树、桉树、竹节海棠等，以一个茎尖或一小块叶片为基数，经组织培养后，一年内可增殖1~10万株。特别是对一些难以繁殖或繁殖很慢的名贵花木、果树及稀有植物，通过组织培养能获得很大量的新个体，这在生产上具有极为重要的意义。 培育无病毒作物植株 长期进行营养繁殖的植物，体内经常积累病毒，从而严重地影响产量（如马铃薯）或观赏价值（如菊花）。科学家们发现，植物体内的病毒是沿着维管束分布的，茎尖分生组织并不带病毒。因此，用茎尖进行组织培养，就可以从带病毒的植株上获得无病毒的植株。这一技术在马铃薯、草莓、菊花等培育上得到应用，产生了十分可观的经济效益。 培育作物新品种 用花药培养进行单倍体育种，不仅可以缩短育种周期，还能解决杂交中种胚的败育或杂交不亲和的问题，从而培育出新的作物品种。“花寒早”、“新秀”等一批由花药培育成的水稻新品种，以它们高产优质、整齐一致的特有丰姿出现在祖国的田野上。此外，用体细胞杂交，可以弥补有性杂交的困难，选育出无性杂交新品种。 保存植物种质 植物组织可以用低温或超低温来贮存，这样就大大减少了原先一代代保存材料所花费的人力、物力和时间。另外，由于用小的空间保存了大量的品种资源，运输起来也很方便。 总之，随着组织培养这一技术的发展及各种培养方法的广泛应用，特别是生物工程和工厂化育苗的概念提出以后，它将以新兴产业的面貌在技术革命中发挥重大作用。 二、教学建议 学习组织培养技术的目的在于让学生更好地了解植物细胞具有全能性这一特点。因此，在进行实验之前必须让学生明确组织培养的原理，以免盲目操作，达不到教学目的。 由于学生对于组织培养技术中的关键技术——无菌操作技术还不够熟练，因此，在组织培养过程中，确保无菌操作是重点也是难点。实验开始之前，务必组织好学生进行“讨论和思考”活动，使学生对实验安排有更明确的认识，确保实验的成功。 该实验难度较大，教师的课前准备工作必须充分。组织培养所需的培养基建议在课前配制好，既节省时间，简化实验过程，又能让学生的注意力集中在组织培养技术的关键步骤上，使教学目的更加突出。 由于实验必须在无菌条件下才能成功，因此做好灭菌工作至关重要。在进行植物组织培养前，应做好以下几项工作： （1）将培养基和接种所需的物品放在高压蒸气灭菌锅中灭菌。 （2）在接种的前一天，将接种室的四个墙角用甲醛溶液和高锰酸钾熏蒸。准备接种时，提前1 h在接种室内用喷雾器喷洒来苏水（将商品来苏水与水以1：50的比例混匀，配成水溶液），桌、椅也用来苏水擦拭。接种箱内用甲醛溶液和高锰酸钾熏蒸。 （3）在接种箱内放好接种时所需要的物品：盛有培养基的锥形瓶或大试管、盛有酒精棉球的广口瓶、培养皿、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、无菌水、酒精灯、镊子、解剖刀、火柴、滤纸。 （4）在接种前无菌室和接种箱内用紫外灯灭菌（无菌室照射20～50 min，接种箱照射15 min）。 （5）接种前，操作者要用肥皂清洗双手，擦干，再用酒精棉球擦拭双手。 三、器材用具 1. 胡萝卜根（也可以用其他植物的器官或组织，如菊的叶片）。 2. 锥形瓶（50 mL）或大试管，盛有酒精棉球的广口瓶，带螺口盖的玻璃瓶，培养皿，解剖刀，镊子，滤纸，烧杯，酒精灯，火柴，线绳，硫酸